Lactobacillus spp 10 5 что это значит: Что нужно знать о бактериальном вагинозе — Практическая медицина — Практическая медицина. Журнал для практикующих врачей и специалистов

Содержание

Микробиологическое исследование мочи

Моча – это стерильная жидкость организма, которая легко контаминируется микрофлорой промежности, уретры и влагалища. Микробы, колонизирующие урогенитальный тракт, могут вызывать инфекцию в мочевыводящих путях. По этой причине при микробиологическом исследовании мочи очень важны правильное взятие пробы, транспортировка и хранение. К числу специфических симптомов уроинфекций относятся болезненное или учащенное мочеиспускание, боли внизу живота или в спине. У детей также в качестве неспецифических симптомов могут быть отсутствие аппетита, рвота, раздражительность и повышение температуры.

К нормальной урогенитальной микрофлоре относятся – стрептококки группы вириданс, Neisseria spp., Corynebacterium spp., Lactobacillus spp., Staphylococcus spp.

Из наиболее частых возбудителей уроинфекций следует назвать Escherichia coli, Klebsiella spp., Proteus spp., Enterococcus spp., Staphylococcus saprophyticus ja Pseudomonas spp.

Показания:

 

  • Подозрение на уроинфекцию
  • Повторные инфекции уротракта
  • Асимптомная бактериурия

Исследуемый материал: Средняя порция мочи, моча, полученная после массажа предстательной железы, моча, полученная при катетеризировании или при пункции мочевого пузыря.

Метод анализа: Аэробный посев на среды, идентификация возбудителя болезни, определение лекарственной чувствительности.

Интерпретация результата: 

  • Посев мочи проводится из 1μl мочи. Окончательная оценка дается посеву через 48 часов инкубации, когда при отсутствии роста выдается ответ – «роста аэробных микробов не имеется». Данный ответ показывает, что в концентрации ≥103 PMÜ/ml в моче отсутствует рост микробов.
  • Количество бактерий ≥105 PMÜ/mL в утренней средней порции мочи считается весьма вероятной причиной инфекций мочевыводящих путей (UTI – urinary tract infections).
  • Количество бактерий <105 PMÜ/mL также может иметь важное клиническое значение в случаях, если:
    • у пациента имеются симптомы, указывающие на инфекцию
    • в моче имеется пиурия
    • пациент ранее получал антибактериальное лечение
    • в пробном материале случайная моча
    • имеется подозрение на пиелонефрит или простатит
    • пациент с ослабленным иммунитетом (беременные, пожилые люди, маленькие дети и т. д.)  
  • Если у пациента в посеве мочи ≥3 разных видов микробов в равных количествах, то очевидно наличие смешанной флоры и поэтому идентификацию возбудителей и их исследование на лекарственную чувствительность не проводят. Смешанная флора у неосложненных пациентов означает контаминацию мочи с нормальной урогенитальной микрофлорой.
  • Обнаружение различных микробов в моче (исключая бактерии, относящиеся к микрофлоре кожи), полученной при пункции мочевого пузыря, указывает на инфекцию уротракта.
  • Исследование на грибы относится к числу аэробных посевов. Посев мочи с концентрированием на специальные среды для грибов бывает необходим в случаях, когда количество грибов в пробе очень маленькое. Повторное обнаружение грибов того же типа в моче может быть причиной уроинфекции.
  • Микробиологическое исследование на анаэробы возможно произвести только из пунктата мочевого пузыря.
  • При адекватном антибактериальном лечении микробы погибают в течение 24-48 часов, хотя пиурия может сохраняться еще некоторое количество дней. Если в моче сохраняется пиурия, но аэробный посев при повторных исследованиях отрицателен, то в данном случае могут иметь место анаэробная инфекция, урогенитальные микоплазмы или туберкулез.

Рост PMÜ/
mL

 

Количество видов

 

Интерпретация

Идентификация, чувствительность

 

Другие причины

 

 

 

 

 

≥10⁵

1-2 вида

Вероятно возбудитель инфекции мочевыводящих путей

 

Да

• Нахождение при комнатной температуре более  2 часов
• Если нет пиурии, то рекомендуется повторное
исследование

≥3 вида

Смешанная флора

Нет

• Неправильное взятие или хранение пробы
• При возникновении симптомов рекомендуется
повторное исследование

3 вида, один доминирующий

 

Доминирующий вид может быть возбудителем инфекции мочевыводящих путей

Да, доминирующему виду

• Если есть подозрение на контаминацию или проба находилась при комнатной температуре более 2 часов, то рекомендуется повторное исследование

 

 

 

 

 

104– 10⁵

1-2 вида

Вероятно возбудитель инфекции мочевыводящих путей

 

Да

• Случайная моча
• Частое моче испускание
• Нахождение при комнатной температуре более 2 часов
• Если нет пиурии, то рекомендуется повторное
исследование

≥3

Смешанная флора

Нет

• Неправильное взятие или хранение пробы. При  возникновении симптомов рекомендуется повторное исследование

3 вида, один доминирующий

Доминирующий вид может быть возбудителем инфекции мочевыводящих путей

Да

• Если есть подозрение на контаминацию или проба находилась при комнатной температуре длительное время, то рекомендуется повторное исследование

 

 

<104

1-2 вида

Может быть возбудитель инфекции мочевыводящих путей

Да

• Случайная моча
• Частое моче испускание
• Пунктат мочевого пузыря

≥3

Смешанная флора

Нет

• Неправильно взятая проба
• При возникновении симптомов рекомендуется
повторное исследование

Флороценоз анализ в Лабтест СПб

Флороценоз

ФЛОРОЦЕНОЗ тесты, применяемые для диагностики нарушений микрофлоры влагалища женщин репродуктивного возраста. Позволяют диагностировать заболевание, а не только расшифровать состав микрофлоры половых органов.

 

  1. Флороценоз- бактериальный вагиноз – 30-40% встречаемость в гинекологической практике. Невоспалительный инфекционный синдром,
     
    обусловленный резким снижением количества перекись продуцирующих лактобактерий и замещением их кокко — бациллярной преимущественно анаэробной микрофлорой (G.vaginalis и Atopobium vaginae -ключевые факторы баквагиноза, Bacteroides spp., Prevotella spp., Mobiluncus spp и др.). Бактериальный вагиноз не относится к ИППП, а является проявлением дисбиоза влагалищной флоры. Половым путем не передается.

 

Жалобы/ Объективно

Определяемые параметры

В 43% случаев бессимптомно

Общее кол-во бактерий (ДНК Bacteria)

Выделения из влагалища беловато-серые

Кол-во лактобактерий (ДНК Lactobacillus spp.)

Выделения с неприятным запахом

Кол-во ДНК Gardnerella vaginalis

Редко зуд наружных половых органов

Кол-во ДНК Atopobium vaginae

 

Выявление в препарате только Gardnerella vaginalis диагностической ценности практически не имеет!

 

Интерпретация результатов

Общее кол-во ДНК бактерий менее 106 ГЭ/мл

Кол-во бактерий недостаточно для анализа

Общее кол-во клеток человека менее 50 000 в мл

Кол-во клеток недостаточно для анализа

Общее кол-во ДНК бактерий не менее 106 ГЭ/мл, кол-во Lactobacillus spp. значительно снижено, кол-во G.vaginalis и A.vaginae значительно повышено.

Соотношения концентраций ДНК микроорганизмов соответствуют бактериальному вагинозу

Общее кол-во ДНК бактерий не менее 106 ГЭ/мл, кол-во Lactobacillus spp. соответствует кол-ву Bacteria,

G.vaginalis и A.vaginae отсутствуют или значительно ниже Lactobacillus spp.

На основании соотношений концентраций ДНК микроорганизмов бактериальный вагиноз не установлен

Общее кол-во ДНК бактерий не менее 106 ГЭ/мл, кол-во Lactobacillus spp. ниже кол-ва Bacteria, кол-во G.vaginalis и A.vaginae повышено.

Соотношения концентраций ДНК микроорганизмов соответствуют промежуточному состоянию микрофлоры

Общее кол-во ДНК бактерий не менее 106 ГЭ/мл, кол-во Lactobacillus spp. ниже кол-ва Bacteria,

G.vaginalis и A.vaginae отсутствует или значительно ниже Lactobacillus spp.

Соотношения концентраций ДНК микроорганизмов соответствуют дисбиозу неуточненной этиологии

 

 

  1. Флороценоз-Аэробы — 20-30% встречаемость в гинекологической практике. Аэробный вагинит – нарушение микрофлоры (преобладание аэробной флоры над лактобактериями) в сочетании с развитием местного воспаления и иммунного ответа. Половым путем не передается.

 

Жалобы/ Объективно

Определяемые параметры

В 15% случаев бессимптомно

Общее кол-во бактерий (ДНК Bacteria)

Выделения из влагалища желтого цвета

Кол-во лактобактерий (ДНК Lactobacillus spp.)

Без неприятного запаха

Кол-во ДНК Enterobacteriaceae 

Зуд/жжение во влагалище

Кол-во ДНК Streptococcus spp

Вульвит/вагинит (гиперемия преддверия и стенок влагалища)

Кол-во ДНК Staphylococcus spp

Нередко диспареуния (сексуальные расстройства)

 

 

Интерпретация результатов

Аэробы не обнаружены

 Лечение не требуется

Аэробы обнаружены, кол-во лактобактерий не снижено

 Лечение не требуется

Аэробы обнаружены, кол-во лактобактерий снижено 

 Аэробный вагинит

 

 

  1. Флороценоз –мико-уреаплазмы —  20-30% встречаемость в гинекологической практике. Диагностируется заболевание на основании количественного определения ДНК условно-патогенных Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum на фоне бактериального вагиноза. Передается половым путем.

 

Жалобы/ Объективно

Определяемые параметры

 В 30-50% случаев бессимптомно

 Общее кол-во бактерий (ДНК Bacteria)

 Выделения из влагалища

 Кол-во лактобактерий (ДНК Lactobacillus spp.)

 Без неприятного запаха

 Кол-во ДНК Gardnerella vaginalis

 Зуд во влагалище

 Кол-во ДНК Atopobium vaginae

Дизурия

Кол-во ДНК  Mycoplasma hominis

Фактор риска — большое число половых

Кол-во ДНК  Ureaplasma urealyticum

партнеров

Кол-во ДНК  Ureaplasma parvum

 

Интерпретация результатов

Мико-уреаплазмы  не обнаружены

Лечение не требуется

Мико-уреаплазмы  обнаружены в кол-ве менее 105 ГЭ/мл

Лечение не требуется

Мико-уреаплазмы  обнаружены в кол-ве более 105 ГЭ/мл

Требуется лечение

 

 

  1. Флороценоз-Кандиды —  20-30% встречаемость в гинекологической практике. Диагностирует вульвовагинальный кандидоз, при котором симптомы и клинические проявления неспецифичны. Необходимо определять количество и вид Candida из-за различий в схеме лечения и чувствительности к препаратам. Половым путем не передается.

 

Жалобы/ Объективно

Определяемые параметры

В 20% случаев бессимптомно

ДНК Сandida albicans (встречаемость 70-80%)

Творожистые выделения

ДНК Сandida glabrata (15-35%)

Зуд/жжение на коже аногенитальной области

ДНК Сandida krusei (5-27%)

Вульвит/вагинит

ДНК Сandida parapsilosis (1-26%)

Дизурия, диспареуния (сексуальные расстройства)

ДНК Сandida tropicalis (1-14%)

 

Интерпретация результатов

Сandida не обнаружены

Лечение не требуется

Кол-во Сandida  менее 102 ГЭ/мл

Носительство, лечение не требуется

Кол-во Сandida  более 102 ГЭ/мл, симптомы воспаления отсутствуют

Носительство, лечение не требуется

Кол-во Сandida  более 102 ГЭ/мл, симптомы воспаления присутствуют

Кандидозный вульвовагинит, требуется лечение.

 5.    Флороценоз – ИППП/ NCMT (N-Neisseia gonorrhoeae, C-Chlamydia trachomatis, M-Mycoplasma genitalium, T-Trichomonas vaginalis)- группа облигатно-патогенных микроорганизмов, обнаружение которых является основанием для назначения терапии вне зависимости от наличия клинических проявлений. Целесообразно назначать одновременно 4 инфекции, т.к. клиническая картина при их наличии одинакова, а схемы лечения различаются для всех четырех микроорганизмов.  Передается половым путем.

 

Жалобы/ Объективно

Определяемые параметры

 Выделения из влагалища

 ДНК Neisseia gonorrhoeae

 Дизурия, боли внизу живота

 ДНК Chlamydia trachomatis

 Цервицит, кольпит, уретрит

 ДНК Mycoplasma genitalium

 Диспареуния (сексуальные расстройства)

 ДНК Trichomonas vaginalis

 

Интерпретация результатов

 Микроорганизмы не обнаружены

 Лечение не требуется

 Мико-уреаплазмы обнаружены

 Требуется лечение

         Взятие материала для диагностического обследования и мониторинга эффективности терапии рекомендуется проводить в одни и те же дни цикла (5-7 день, 24-26 день).

Актуальную стоимость можно посмотреть в прайс-листе на медицинские анализы Лабтест СПб.

12.06.2019г.

ФЛОРОЦЕНОЗ — это тест нового поколения для диагностики урогенитальных инфекций у женщин

Это диагностическое решение, созданное профессиональным сообществом в ответ на ряд реальных проблем диагностики урогенитальных инфекций, которые встречают практикующие врачи-клиницисты.

Тест Флороценоз — это диагностическое решение, созданное профессиональным сообществом в ответ на ряд реальных проблем диагностики урогенитальных инфекций, которые встречают практикующие врачи-клиницисты.

Среди этих проблем можно выделить широкое распространение низкоинформативных методов диагностики урогенитальных инфекций и тестов, направленных на выявление микроорганизмов сомнительной клинической значимости, но основной проблемой является отсутствие единого алгоритма, позволяющего с максимальной объективностью диагностировать конкретные инфекционные заболевания урогенитального тракта женщин и определить оптимальную схему их лечения.

Тест Флороценоз — решение проблемы отсутствия диагностических алгоритмов

Тест Флороценоз — это итог многолетнего сотрудничества специалистов по лабораторной диагностике инфекций и практикующих врачей гинекологов и дерматовенерологов.

Метод ПЦР, которым выполняется тест Флороценоз, рекомендован для диагностики всех урогенитальных инфекций

Тест Флороценоз выполняется методом ПЦР (полимеразной цепной реакции) «в реальном времени», который, согласно последним Клиническим рекомендациям Российского Общества Дерматовенерологов и Косметологов, применим для диагностики всех урогенитальных инфекций:

— гонококковая инфекция, хламидийная инфекция, урогенитальный трихомониаз и урогенитальные заболевания, вызванные Mycoplasma genitalium

— бактериальный вагиноз

— урогенитальный кандидоз

— урогенитальные заболевания, вызванные Ureaplasma spp. и Mycoplasma hominis

— аэробный вагинит

Какие группы микроорганизмов можно встретить в урогенитальном тракте женщины.

Микроорганизмы, которые должны быть во влагалище

Во-первых, это лактобактерии (Lactobacillus spp.) — микроорганизмы, которые должны быть во влагалище здоровой женщины репродуктивного возраста. Основная функция лактофлоры — создание особой кислой среды влагалища, которая способствует защите от размножения патогенной и транзиторной условно-патогенной микрофлоры. Также нормальная лактофлора стимулирует местный иммунитет организма. Отсутствие или снижение количества лактобактерий говорит о нарушении биоценоза влагалища, поэтому определение количества лактобактерий необходимо врачу для правильного понимания состояния пациентки.

Микроорганизмы, которые могут обнаруживаться во влагалище

Кроме лактобактерий, во влагалище здоровой женщины могут присутствовать так называемые условно-патогенные микроорганизмы. Присутствуя в низком титре, они не приводят к развитию заболеваний. При повышении концентрации условно-патогенных микроорганизмов могут развиваться состояния, снижающие качество жизни пациенток и оказывающие неблагоприятное влияние на их репродуктивную функцию, том числе приводящие к осложнениям во время беременности и родов. Среди условно-патогенных микроорганизмов, заселяющих слизистые влагалища, к клинически значимым относятся:

· Микроорганизмы, ассоциированные с бактериальным вагинозом: гарднерелла (Gardnerella vaginalis) и атопобиум (Atopobium vaginae)

· Аэробные микроорганизмы, приводящие к развитию аэробного вагинита: энтерококки (Enterobacteriaceae), стрептококки (Streptococcus spp.) и стафилококки (Staphylococcus spp.)

· Условно-патогенные микоплазмы: уреаплазмы (Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum) и микоплазма хоминис (Mycoplasma hominis).

· Наиболее распространенные 5 видов грибов рода Candida — возбудители кандидоза (молочницы): С.albicans, C.glabrata, C.krusei, C.parapsilosis, C.tropicalis.

Микроорганизмы, которые не должны присутствовать во влагалище

Наконец, некоторых микроорганизмов не должно быть во влагалище. Это облигатно-патогенные микроорганизмы (инфекции, передаваемые половым путём, ИППП), требующие лечения вне зависимости от количества возбудителя и субъективной оценки женщиной состояния своего здоровья: Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium и Trichomonas vaginalis. Выявление этих микроорганизмов обязательно должно входить в алгоритм обследования, вне зависимости от наличия или отсутствия клинических проявлений, поскольку все эти инфекции могут протекать абсолютно бессимптомно.

Таким образом, определяется спектр микроорганизмов, выявление которых разумно и обоснованно для получения объективной картины вагинальной микрофлоры пациентки. Именно эти микроорганизмы составляют диагностическое исследование Флороценоз — принципиально новое решение для диагностики инфекций влагалища и шейки матки, позволяющее поставить обоснованный диагноз при наличии инфекционного процесса любого генеза.

Важно!!! Тест Флороценоз назначается только в комплексе, все 5 групп!

Исключение может составить только NCMT. В первый раз назначается ВСЕ 5 групп, при повторе можно назначить без NCMT.

Запись по телефону: 204-2-700 доброжелательные сотрудники cаll-центра всегда помогут решить любой вопрос, подскажут нужного специалиста, подберут удобное для Вас время посещения.

Анализ изменения состояния влагалищной микрофлоры у женщин репродуктивного возраста в условиях трёхсуточной «сухой» иммерсии без использования средств профилактики | Ильин

Введение

В настоящее время участие женщин в космических полётах и наземных модельных экспериментах возрастает. В связи с этим неизбежно встают вопросы о влиянии факторов полёта на состояние женского организма и, в частности, на стабильность, видовые и количественные изменения микрофлоры влагалища.

Известно, что факторы космической миссии являются причиной формирования стресса и негативно сказываются на микрофлоре верхних дыхательных путей и кишечника [1]. Наблюдается увеличение роста условно-патогенных микроорганизмов (УПМ) и снижение титра протективных групп бактерий, что, в совокупности с длительным нахождением в замкнутом пространстве космического корабля или гипотетической лунной станции, является серьёзным фактором риска возникновения воспалительных процессов в репродуктивной системе женщин.

Поддержание постоянства микрофлоры влагалища является важным для здоровья и качества жизни женщин. Изменение рациона питания, особенностей гигиенических процедур, стресс — всё это является фактором смещения баланса влагалищной микрофлоры и снижения естественного колонизационно-резистентного барьера [2]. Это проявляется в первую очередь в снижении количества Lactobacillus spp. и увеличении условно-патогенной факультативно и облигатно-анаэробной микрофлоры, характерной для женщин с воспалительными заболеваниями органов малого таза [3].

Для изучения влияния отдельных факторов космического полёта на системы организма наиболее удобными являются модельные эксперименты, в частности, «сухая» иммерсия (СИ). Во время эксперимента испытатели находятся в имитируемой невесомости и испытывают влияние целого спектра факторов космического полёта: гиподинамию, перераспределение жидких сред [4]. Во время эксперимента испытатель, одетый в нижнее бельё, укладывается на платформу на гидроизолирующую плёнку в иммерсионную ванну эргономического дизайна, заполненную водой. Иммерсионная ванна сконструирована таким образом, что, когда платформа опускается, испытатель оказывается погруженным в воду полностью, за исключением головы. Таким образом, после погружения испытатель находится в безопорном подвешенном состоянии: имитируемой невесомости. Испытателю позволяется покидать ванну только на 10 мин в сутки для принятия душа и совершения гигиенических процедур.

Целью данной работы является сравнительная оценка состояния микробиоты влагалища у женщин-испытателей до эксперимента и по завершении 3-суточного пребывания в условиях СИ.

Материалы и методы

Эксперимент одобрен биоэтической комиссией ГНЦ РФ – ИМБП РАН (протокол № 544 от 16.06.2020).

В исследование включены 6 женщин-испытателей репродуктивного возраста, которые во время эксперимента не принимали антибактериальные препараты и иные средства, способные оказать влияние на микрофлору влагалища и цервикального канала. Женщины находились в иммерсионной ванне в течение 3 сут. Начало эксперимента для каждого испытателя определяли индивидуально из расчёта, что окончание пребывания в условиях СИ попадёт на 9–10-й дни менструального цикла.

Отделяемое влагалища и цервикального канала отбирали на 10–11-й дни менструального цикла дважды: до начала эксперимента и сразу после его завершения.

Микробиологический анализ состава микробиоты влагалища и цервикального канала проводили на базе Института микробиологии, антимикробной терапии и эпидемиологии НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова.

Всем испытателям выполнены микроскопия вагинального отделяемого, окрашенного по Граму, и культуральное исследование в соответствии с медицинской технологией «Интегральная оценка состояния микробиоты влагалища. Диагностика оппортунистических вагинитов» [5]. Взятие материала осуществляли стерильным дакроновым тампоном из заднего свода влагалища и после обработки шейки стерильным ватным тампоном — из цервикального канала в пробирки с транспортной средой Эймса («Medical Wire»). Вагинальное содержимое и отделяемое цервикального канала засеивали на селективные и неселективные агаризованные плотные питательные среды. Для выделения факультативно-анаэробных микроорганизмов использовали колумбийский агар, хромогенную прозрачную среду Brilliance («Oxoid»), маннит-солевой агар («Himedia»), энтерококковый агар, среду Эндо и агар Сабуро (ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии). Инкубировали посевы в условиях СО2-инкубатора («Jouan»). Лактобациллы культивировали на среде лактобакагар (ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии), строгие анаэробы — на прередуцированном агаре Шедлера («Oxoid») с необходимыми добавками в условиях анаэробного бокса («Whitley DG 250 Anaerobic Workstation») в атмосфере трёхкомпонентной газовой смеси (N2 80%, CO2 10%, H10%). Видовую идентификацию микроорганизмов проводили методом MALDI-TOF-MS-анализа с использованием времяпролётного масс-спектрометра «Autoflex III» c программным обеспечением «Maldi BioTyper v.3.0» («Bruker Daltoniks»).

Для количественной оценки изменения состояния влагалищной микрофлоры и микрофлоры цервикального канала использовали эубиотический индекс (Ei), отражающий отношение числа положительных состояний микробиоты (до эксперимента по отношению к норме и после эксперимента по отношению к состоянию до эксперимента) к числу отрицательных. Повышение Ei означает улучшение состояния микробиоты по определённому показателю (например, после эксперимента выявлены увеличение или стабильно высокий титр протективных групп микроорганизмов или снижение титра УПМ). Значение Ei меньше 1,0 означает, что количество негативных показателей микробиоты преобладает над количеством положительных, что соответствует дисбиозу или близкому к нему состоянию.

Учитывая малое количество испытателей, достоверность различия результатов по Ei до и после СИ оценивали с применением дисперсионного анализа для малых выборок (среднее значение ± стандартное отклонение) [6]. Анализ проводили с помощью пакета программ для статистической обработки данных «Minitab».

Результаты и обсуждение

Все выделенные микроорганизмы разделены на 3 группы:

  • 1-я группа — факультативно-анаэробные УПМ (включая дрожжевые грибы Саndida albicans), присутствие которых в высоких титрах является риском развития аэробного вагинита и кандидозного вульвовагинита;
  • 2-я группа — облигатно-анаэробные и микроаэрофильные УПМ (включая Gardnerella vaginalis), ассоциированные с бактериальным вагинозом;
  • 3-я группа — Lactobacillus spp. [7–9].

Испытатели были разделены на 2 группы (по 3 человека в каждой группе) в зависимости от оцениваемого параметра.

Для оценки риска развития и усугубления аэробного вагинита в отдельную группу выделены те волонтёры, у которых изначально наблюдалось значительное количество облигатной (главной) и факультативной (сопутствующей) факультативно-анаэробной микрофлоры: Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Escherichia coli, Proteus vulgaris, Enterococcus spp., C. albicans.

Аналогично для оценки риска и усугубления бактериального вагиноза были отобраны волонтёры, у которых имелось некоторое разнообразие строго анаэробных микроорганизмов (Porphyromonas somerae, Prevotella bivia) и G. vaginalis.

Кроме оценки изменений по выбранному параметру, в обеих группах также оценивалось количество протективной микрофлоры, т.е. Lactobacillus spp. Обращает на себя внимание небольшое снижение Ei, рассчитанного для всей микрофлоры, с 1,25 до СИ до 1,0 после СИ, что указывает на некоторую дестабилизацию состояния микробиоты после 3-суточной СИ.

В группе риска развития аэробного вагинита отмечено ухудшение состояния микробиоты влагалища и по факультативно-анаэробным УПМ, и по протективной микрофлоре (рис. 1): Ei снижается, что свидетельствует об уменьшении позитивных изменений микробиоты и увеличении негативных.

Рис. 1. Ei факультативно-аэробной (а) и протективной (б) микрофлоры влагалища до и после краткосрочной СИ в группе риска развития аэробного вагинита.
Fig. 1. Eubiotic index of facultative aerobic (a) and protective (b) vaginal microflora before and after short-term «dry» immersion in the risk group for developing aerobic vaginitis.

У некоторых испытателей cтали появляться виды УПМ, которые ранее не выявлялись, причём в титрах от 103 КОЕ/мл и выше. Также отмечено резкое уменьшение количества Lactobacillus spp.

В группе испытателей, у которых не выявлено изначально высокой обсеменённости факультативно-анаэробными микроорганизмами, Ei по факультативно-анаэробным микроорганизмам увеличился, как и индекс по протективной группе, что говорит об активации колонизационной резистентности и вытеснении факультативных анаэробов протективными группами Lactobacillus (рис. 2).

Рис. 2. Ei факультативно-аэробной (а) и протективной (б) микрофлоры влагалища до и после краткосрочной СИ в группе, не находящейся в зоне риска развития аэробного вагинита.
Fig. 2. Eubiotic index of facultative aerobic (a) and protective (b) vaginal microflora before and after short-term «dry» immersion in a group not at risk of developing aerobic vaginitis.

При анализе облигатно-анаэробной микрофлоры выявлено увеличение Ei в группе риска развития бактериального вагиноза (рис. 3), что свидетельствует о некотором улучшении ситуации. При этом Ei по Lactobacillus spp. снизился, в то время как в группе испытателей, у которых изначально не было строго анаэробных УПМ, он оставался стабильным, хотя и несколько ниже 1,0, что указывает на незначительное преобладание негативных изменений над позитивными.

Рис. 3. Ei факультативно-анаэробной (а) и протективной (б) микрофлоры влагалища до и после краткосрочной СИ в группе, находящейся в зоне риска развития бактериального вагиноза.
Fig. 3. Eubiotic index of facultative anaerobic (a) and protective (b) vaginal microflora before and after short-term «dry» immersion in a group at risk of developing bacterial vaginosis.

В силу меньшего видового разнообразия микробиоты цервикального канала нами оценены изменения до и после 3-суточной СИ у всех испытателей (6 человек) без разделения на группы. У всех испытателей отмечено снижение Ei с 1,0 до 0,44, при этом наблюдалось достоверное снижение количества лактобацилл всех видов.

Согласно данным литературы, у пациенток с диагностированными воспалительными заболеваниями придатков матки при исследовании микрофлоры влагалища выявляется достоверное превышение концентрации стафилококков, кишечной палочки, гарднереллы и стрептококков над количеством лактобацилл [3]. В проведённом нами исследовании у половины испытателей отмечены увеличение аэробной микрофлоры и снижение количества Lactobacillus, что свидетельствует об увеличении риска развития воспалительных заболеваний органов малого таза.

Следует отметить, что испытатели, у которых преобладали лактобациллы вида L. crispatus в целом имели меньший титр УПМ. У одной женщины-испытателя наблюдалась элиминация L. crispatus после СИ и появление C. albicans в титре 10КОЕ/мл. Полученные данные согласуются с проводимыми ранее исследованиями, свидетельствующими о том, что данный вид лактобацилл проявляет хорошую антагонистическую активность в отношении E. coli и Candida spp. и является перспективным пробиотическим микроорганизмом [10][11].

Выводы

1. После 3-суточной иммерсии в целом наблюдалось ухудшение состояния микрофлоры всех волонтёров.

2. У испытателей, которые до иммерсии имели высокий титр аэробных микроорганизмов, количество аэробной микрофлоры существенно увеличилось, при этом количество протективных видов снижалось, что свидетельствует о повышении риска развития аэробного вагинита в условиях, создаваемых длительной иммерсией.

3. У испытателей, которые до иммерсии имели низкий титр аэробных микроорганизмов, количество аэробной микрофлоры уменьшилось, а количество лактобацилл повысилось, что говорит об активации колонизационной резистентности микрофлоры влагалища.

4. У испытателей, у которых до иммерсии обнаруживалась существенная обсеменённость анаэробной УПМ, количество всех анаэробов, включая лактобациллы, снизилось, что подтверждает сделанное выше предположение о повышении риска возникновения воспалительных заболеваний влагалища.

5. Эубиотический индекс, рассчитанный для цервикального канала, после 3-суточной СИ снизился. Это говорит об ухудшении состояния микрофлоры данного биотопа.

1. Turroni S., Magnani M., Kc P., Lesnik P., Vidal H., Heer M. Gut microbiome and space travelers’ health: state of the art and possible pro/prebiotic strategies for long-term space missions. Front. Physiol. 2020; 11: 553929. https://doi.org/10.3389/fphys.2020.553929

2. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз (клиника, диагностика, лечение): Автореф. дисс. … д-ра мед. наук. СПб.; 1995.

3. Тониян К.А., Арютин Д.Г., Белоусова А.А. Репродуктивное здоровье женщин после хирургического лечения острых гнойных воспалительных заболеваний придатков матки. Мать и дитя в Кузбассе. 2018; (4): 37–43.

4. Tomilovskaya E., Shigueva T., Sayenko D., Rukavishnikov I., Kozlovskaya I. Dry immersion as a ground-based model of microgravity physiological effects. Front. Physiol. 2019; 10: 284. https://doi.org/10.3389/fphys.2019.00284

5. Анкирская А.С., Муравьева В.В. Интегральная оценка состояния микробиоты влагалища. Диагностика оппортунистических вагинитов. Акушерство и гинекология: новости, мнения, обучение. 2020; 8(1): 69–76. https://doi.org/10.24411/2303-9698-2020-11009

6. Кулаичев А.П. Методы и средства комплексного статистического анализа данных: Учебное пособие. М.: ИНФРА-М; 2017.

7. Савичева А.М., Тапильская Н.И., Шипицына Е.В., Воробьева Н.Е. Бактериальный вагиноз и аэробный вагинит как основные нарушения баланса вагинальной микрофлоры. Особенности диагностики и терапии. Акушерство и гинекология. 2017; (5): 24–31. https://doi.org/10.18565/aig.2017.5.24-31

8. Мелкумян А.Р. Инновационные методы видовой идентификации лактобактерий в оценке состояния микробиоты влагалища у беременных женщин: Автореф. дисс. … канд. мед. наук. М.; 2013.

9. Gladysheva I., Cherkasov S. Corynebacterium species in the female genital tract – pathogens or potential probiotics. Int. J. Pharma Bio Sci. 2018, 9(4): 265–72. https://doi.org/10.22376/ijpbs.2018.9.4.b265-272

10. Hütt P., Lapp E., Štšepetova J., Smidt I., Taelma H., Borovkova N., et al. Characterisation of probiotic properties in human vaginal lactobacilli strains. Microb. Ecol. Health Dis. 2016; 27: 30484. https://doi.org/10.3402/mehd.v27.30484

11. He Y., Niu X., Wang B., Na R., Xiao B., Yang H. Evaluation of the inhibitory effects of Lactobacillus gasseri and Lactobacillus crispatus on the adhesion of seven common lower genital tract infection-causing pathogens to vaginal epithelial cells. Front. Med. (Lausanne). 2020; 7: 284. https://doi.org/10.3389/fmed.2020.00284


Что такое Lactobacillus spp у женщин?

Что такое Lactobacillus spp у женщин?

Лактобактерии — род грамположительных анаэробных неспорообразующих молочнокислых бактерий, которые являются представителями облигатного (который не могут существовать вовне) бактериоценоза здорового человека. На лактобактерии приходится около 10% нормофлоры. Они доминируют у детей раннего возраста.

Что такое Lactobacillus spp?

Лактобактерии (Lactobacillus spp.) занимают ведущее место в вагинальном микробиоценозе. Они участвуют в формировании экологического барьера и обеспечивают резистентность вагинального биотопа, препятствуя проникновению патогенных микроорганизмов.

Что такое лактобациллы в мазке?

Лактобациллы обладают способностью перерабатывать гликоген в молочную кислоту, продуцировать пероксид водорода, что позволяет поддерживать постоянство рН влагалища, снижая кислотность, при этом подавляется рост условно-патогенной микрофлоры.

Что такое Porphyromonas SPP?

5) Gardnerella vaginalis / Prevotella bivia / Porphyromonas spp. Gardnerella vaginalis (гарднерелла) – анаэробная грамвариабельная палочка, бактерия, которая, размножаясь и тем самым снижая количество лактобактерий в нормальной флоре влагалища, вызывает гарднереллез (бактериальный вагиноз).

Каким путем передается гарднерелла?

если Вашей партнерше поставили диагноз «бактериальный вагиноз» (гарднереллез), знайте, что это состояние не инфекционное, не передается никаким путем, в том числе половым. Однако это не мешает Вам тоже пройти обследование — параллельно могут выявиться другие заболевания.

Откуда может появиться гарднерелла?

Причины заболевания гарднереллезом могут быть такие как: снижение иммунитета, стресс, изменения гормонального фона (из-за беременности, родов, аборта и т. д.), смена климата, синтетическое белье и одежда, длительный прием антибиотиков, неправильное питание, хронические заболевания кишечника, иммунодефицит.

Откуда берется гарднерелла у женщин?

Гарднерелла попадает в организм женщины при незащищенном контакте с инфицированным партнером. Поэтому риск заболеть увеличивается при большом количестве сексуальных партнеров. Играет роль и способность нормальной микрофлоры влагалища подавить болезнетворные микроорганизмы.

Что такое гарднерелла и как ее лечить?

Бактериальный вагиноз (гарднереллез) – инфекционное заболевание, возникающее на фоне дисбаланса микрофлоры влагалища: увеличения уровня гарднерелл и других условно-патогенных бактерий и уменьшения содержания лактобактерий.

Какие свечи лучше при Гарднереллезе?

Вагинальные свечи от гарднереллеза должны использоваться на начальных этапах развития заболевания. Для лечения болезни из списка самых эффективных препаратов можно выделить: тержинан; метровагин; гексикон; макмиррор.

Какие препараты лечат Гарднереллу?

Первая линия терапии предполагает пероральный прием препаратов группы нитро-5-имидазолов, таких как метронидазол (Флагил, Трихопол, Клион и др.), орнидазол (Тиберал, Гайро, Дазолик и др.), которые активны в отношении Gardnerella vaginalis и анаэробных бактерий, включая анаэробный стрептококк и Trichomonas vaginalis.

Какие антибиотики пить при Гарднереллезе?

Метронидазол является наиболее применяемым антибиотиком в процессе лечения БВ.

Чем лучше всего лечить бактериальный вагиноз?

Лечение бактериального вагиноза Назначаются антибактериальные препараты – Метронидазол в виде геля или Клиндамицин (крем). Если есть необходимость, назначаются одновременно вагинальные и пероральные препараты. При беременности антибиотики могут быть заменены антисептиками, содержащими йод (Бетадин).

Что такое гарднереллез у мужчин?

В. Гарднереллёз — воспалительное заболевание уретры и наружных половых органов у мужчин и влагалища у женщин, при котором в указанных органах растёт количество бактерий рода Гарднерелла.

Нужно ли лечить гарднереллез?

если Вашей партнерше поставили диагноз «бактериальный вагиноз» (гарднереллез), знайте, что это состояние не инфекционное, не передается никаким путем, в том числе половым. Однако это не мешает Вам тоже пройти обследование — параллельно могут выявиться другие заболевания. лечиться от гарднереллеза Вам не нужно.

Чем опасна гарднерелла у мужчин?

Раньше считалось, что гарднереллез у мужчин не наносит значительного вреда организму, но на данный момент его считают фактором риска по возникновению мужского бесплодия, нарушению потенции.

Можно ли забеременеть во время гарднереллы?

Также женщина может вступить в беременность уже при наличии у нее данного заболевания – это косвенный ответ на вопрос «можно ли забеременеть при наличии гарднереллы и насколько она мешает». Можно, но все же нежелательно.

Можно ли забеременеть во время бактериального вагиноза?

Бактериальный вагиноз — это нарушение соотношения бактерий нормальной микрофлоры, следовательно — нет. Можно ли забеременеть при бактериальном вагинозе? Да, но осложнения при беременности бывают в том числе увеличивается риск преждевременных родов, поэтому лечить лучше до наступления беременности.

Нужно ли лечить гарднереллез у мужчин?

В большинстве случаев мужчинам не назначают лечение, так как гарднерелла в их организме не задерживается. Если же у партнера появились специфические симптомы, а в мазке обнаружили патогенную бактерию, необходимо использовать те же препараты, что и для женщин – метронидазол в таблетках и геле (креме), иммуномодулятор.

Что такое ключевые клетки?

Ключевые клетки – это эпителиальные клетки с прикрепленными к их поверхности бактериями, которые иногда скрывают их границы. Ключевые клетки указыват на бактериальный вагиноз.

Что такое ключевые клетки в мазке у женщин?

Ключевые клетки – слущенные эпителиальные чешуйки, покрытые бактериями гарднереллой. Нормой считается не более 2-3 таких комплексов, в противном случае говорят о бактериальном вагинозе; Дрожжеподобные грибки – также присутствуют в нормальных условиях, однако их активный рост свидетельствует о молочнице (кандидозе).

Что такое клетки плоского эпителия в мазке?

Эти клетки выстилают поверхность слизистой канала шейки матки, влагалища. Количество их зависит от фазы менструального цикла. Норма плоского эпителия в мазке – 5-10 клеток. Если он вообще не обнаружен, это может говорить об атрофии эпителиального слоя, а если количество клеток плоского эпителия повышено – о воспалении.

Что такое гонорея?

Гонорея — это заболевание, передающееся половым путем (ЗППП), которым могут заразиться и мужчины, и женщины. Она может вызвать инфекцию половых органов, прямой кишки и глотки. Это очень распространенная инфекция, особенно среди молодых людей в возрасте 15–24 лет.

Что такое Коккобациллы у женщин?

Коккобаци́ллы — бактерии, имеющие промежуточную между бациллами (палочковидными бактериями) и кокками (сферическими бактериями) форму. Коккобациллами являются: Haemophilus influenzae; Gardnerella vaginalis (бывш.

Что значит если в мазке много слизи?

Обильные выделения слизи — признак воспаления или инфекции. Грибки рода кандида, гонококки, трихомонады в мазке выявляться не должны. Их наличие свидетельствует о заболевании.

Что значит Мобилункус в мазке?

Мобилункус (Mobiluncus) относится к бактериям-палочкам. Это часть условно-патогенной (читай – нормальной) флоры, которая может быть безвредной, но при определенных условиях, например, ослабленном иммунитете, может вызывать заболевания.

ПЦР-диагностика (мазок, соскоб из урогенитального тракта) — сдать анализы в Москве. Научный центр «ЭФиС»

ПЦР-ДИАГНОСТИКА (мазок, соскоб из урогенитального тракта)
Бактериальный вагиноз (Gardnerella vaginalis/ Lactobacillus sp/ Atopobium vaginae/ количество клеток), определение ДНК, кол.ан. до 5 д. 1190 р.
Вирус папилломы человека высокого канцерогенного риска (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52,56, 58, 59), качественное определение ДНК с указанием типа вируса (генотипирование) до 9 д. 900 р.
Вирус папилломы человека высокого канцерогенного риска, без определения типа (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68), определение ДНК, кач.ан. до 5 д. 590 р.
Вирус папилломы человека высокого канцерогенного риска, без определения типа (у женщин) (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68), определение ДНК, кол.ан. до 7 д. 1330 р.
Вирус папилломы человека, типы 16,18 (HPV 16,18), определение ДНК, кач.ан. до 5 д. 360 р.
Вирус папилломы человека, типы 16,18 (HPV 16,18), определение ДНК, кол.ан. до 7 д. 670 р.
Вирус папилломы человека, типы 6,11 (HPV 6,11), определение ДНК, кач.ан. до 5 д. 360 р.
Вирус простого герпеса 1 и 2 типа (HSV 1,2), определение ДНК, кач.ан. до 4 д. 360 р.
Возбудители кандидоза (Candida albicans/Candida glabrata/Candida krusei/Candida parapsilosis /Candida tropicalis), определение ДНК, кол.ан. до 5 д. 660 р.
Гарднерелла вагиналис (Gardnerella vaginalis), определение ДНК, кач.ан. до 4 д. 360 р.
Кандида Альбиканс (Candida albicans), определение ДНК, кач.ан. до 4 д. 360 р.
Микоплазма гениталиум (Mycoplasma genitalium), определение ДНК, кач.ан. до 4 д. 360 р.
Микоплазма гениталиум (Mycoplasma genitalium), определение ДНК, кол.ан. до 5 д. 790 р.
Микоплазма хоминис (Mycoplasma hominis), определение ДНК, кач.ан. до 4 д. 360 р.
Микоплазма хоминис (Mycoplasma hominis), определение ДНК, кол.ан. до 5 д. 740 р.
Нейссерия гонореи (Neisseria gonorrhoeae), определение ДНК, кач.ан. до 4 д. 360 р.
Нейссерия гонореи (Neisseria gonorrhoeae), определение ДНК, кол.ан. до 5 д. 790 р.
Типирование уреаплазмы (U.urealyticum / U. parvum), определение ДНК, кач.ан. до 4 д. 360 р.
Типирование уреаплазмы (U.urealyticum / U. parvum), определение ДНК, кол.ан. до 5 д. 600 р.
Трепонема паллидум (Treponema pallidum)(Сифилис), определение ДНК, кач.ан. до 4 д. 360 р.
Трихомонас вагиналис (Trichomonas vaginalis), определение ДНК, кач.ан. до 4 д. 360 р.
Трихомонас вагиналис (Trichomonas vaginalis), определение ДНК, кол.ан. до 5 д. 790 р.
Урогенитальные инфекции (ПЦР 12 соскоб) (Хламидия трахоматис, Микоплазма гениталиум, Трихомонас вагиналис, Нейссерия гонорея, Микоплазма хоминис, Уреаплазма уреалитикум, Уреаплазма парвум, Гарднерелла вагиналис, Кандида альбиканс, Цитомегаловирус, Вирус простого герпеса 1 и 2), кач.ан. до 4 д. 2590 р.
Урогенитальные инфекции (ПЦР 15 соскоб) (Хламидия трахоматис, Микоплазма гениталиум, Трихомонас вагиналис, Нейссерия гонорея, Микоплазма хоминис, Уреаплазма уреалитикум, Уреаплазма парвум, Гарднерелла вагиналис, Кандида альбиканс, Цитомегаловирус, Вирус простого герпеса 1 и 2, Трепонема паллидум, Вирус папилломы человека 6/11), кач.ан. до 4 д. 3140 р.
Урогенитальные инфекции (ПЦР 7 соскоб) (Хламидия трахоматис, Микоплазма гениталиум, Трихомонас вагиналис, Нейссерия гонорея, Микоплазма хоминис, Уреаплазма уреалитикум, Уреаплазма парвум), кач.ан. до 4 д. 1590 р.
Урогенитальные инфекции (ПЦР 9 соскоб) (Хламидия трахоматис, Микоплазма гениталиум, Трихомонас вагиналис, Нейссерия гонорея, Микоплазма хоминис, уреаплазма уреалитикум, Уреаплазма парвум, Гарднерелла вагиналис, Кандида альбиканс), кач.ан. до 4 д. 2110 р.
Урогенитальные инфекции у женщин (Нейссерия гонорея, Хламидия трахоматис, Микоплазма гениталиум, Трихомонас вагиналис, Уреаплазма уреалитикум, Уреаплазма парвум, Микоплазма хоминис, Кандида альбиканс/глабрата/крузей/парапсилозис и тропикалис, Бактериальный вагиноз) определение ДНК, кол.ан. (соскоб) до 5 д. 2700 р.
Урогенитальные инфекции у мужчин (Нейссерия гонорея, Хламидия трахоматис, Микоплазма гениталиум, Трихомонас вагиналис, Уреаплазма уреалитикум, Уреаплазма парвум, Микоплазма хоминис, Кандида альбиканс/глабрата/крузей/парапсилозис и тропикалис), кол.ан.(соскоб) до 5 д. 2400 р.
Фемофлор 16 (Исследование биоценоза урогенитального тракта) до 5 д. 2420 р.
Фемофлор 8 (Исследование биоценоза урогенитального тракта) до 5 д. 1210 р.
Фемофлор скрин (Исследование биоценоза урогенитального тракта) до 5 д. 1810 р.
Флороценоз и NCMT (ДНК Candida albicans, ДНК Candida glabrata, ДНК Candida krusei, ДНК Candida parapsilosis/tropicalis, ДНК Ureaplasma parvum, ДНК Ureaplasma urealyticum, ДНК Mycoplasma hominis, ДНК Cardnerella vaginalis, ДНК Atopobium vaginae, ДНК Enterobacteriaceae, ДНК Staphylococcus spp., ДНК Streptococcus spp., ДНК Lactobacillus spp., ДНК Bacteria spp., ДНК Neisseria gonorrhoeae, ДНК Chlamydia trachomatis, ДНК Mycoplasma genitalium, ДНК Trichomonas vaginalis), кол.ан. до 3 д. 2700 р.
Хламидия трахоматис (Chlamydia trachomatis), определение ДНК, кач.ан. до 4 д. 360 р.
Хламидия трахоматис (Chlamydia trachomatis), определение ДНК, кол.ан. до 5 д. 790 р.
Цитомегаловирус (Cytomegalovirus), определение ДНК, кач.ан. до 4 д. 360 р.

Ученые Алтайского государственного аграрного университета подтвердили эффективность отечественного пробиотика для сельхозживотных

Ученые Алтайского государственного аграрного университета завершили опытные испытания отечественного пробиотического препарата «Плантарум» для сельскохозяйственных животных, который сможет заместить импортные аналоги.

Современный подход к высокоэффективному животноводству предусматривает использование пробиотикотерапии, которая направлена на формирование, поддержание и своевременную коррекцию состава микрофлоры желудочно-кишечного тракта животных. Применение пробиотиков в кормлении сельскохозяйственных животных позволяет получить от них высококачественную, биологически полноценную и экологически чистую продукцию.

Сегодня на рынке представлено множество пробиотических препаратов для животных. Значительная их доля — зарубежного производства. Коллектив ученых Алтайского агроуниверситета под руководством профессора кафедры технологии производства и переработки продукции животноводства д. с.-х. н. Николая Владимирова провел опытные испытания российского экспериментального пробиотического препарата «Плантарум». Испытания подтвердили его высокую эффективность и определили необходимые дозировки в рационах кормления животных. Исследование проведено в хозяйствах на территории Алтайского края при финансовой поддержке Министерства сельского хозяйства Российской Федерации в рамках государственного задания на научные исследования.

Пробиотический препарат «Плантарум» разработан на Алтае в лаборатории микробиологии молока и молочных продуктов отдела Сибирского научно-исследовательского института сыроделия Федерального Алтайского научного центра агробиотехнологий (руководитель отдела — д .т. н. Ольга Мусина). В состав группы разработчиков вошли заведующий лабораторией молока и молочных продуктов, ведущий научный сотрудник к. б. н. Екатерина Отт и младший научный сотрудник лаборатории микробиологии молока и молочных продуктов, аспирант АГАУ Ирина Функ. Препарат состоит из чистых культур лактобактерий (Lactobacillus plantarum) и пропионовокислых бактерий (Propionibacterium spp.) из Сибирской коллекции микроорганизмов (СКМ), сообщили в Алтайском государственном аграрном университете.

Ученые АГАУ провели испытания экспериментального пробиотического препарата «Плантарум» и установили его влияние на продуктивные показатели и некоторые биологические особенности коз молочных пород. «Нашей задачей было определить эффективность применения «Плантарума» и разработать технологический регламент его применения, что необходимо для следующей стадии внедрения препарата — его регистрации», — пояснил Николай Владимиров. Исследования проводились в ООО К(Ф)Х «ЭкоФерма» (Первомайский район) на протяжении нескольких лет. Объектом исследования являлись половозрастные помесные козы по зааненской породе в возрасте двух лет.

Полученные учеными АГАУ результаты подтвердили, что для повышения молочной продуктивности и качества молока-сырья коз молочного направления продуктивности целесообразно вводить в их рацион пробиотический препарат «Плантарум», экономически эффективная доза которого равняется 0,6 мл/кг массы тела/сут. Суточная доза позволяет увеличить молочную продуктивность коз, повысить сохранность молодняка и снизить затраты на получение 1 килограмма молока. Увеличение дозы введения «Плантарума» (до 0,8 мл/кг) в рацион коз способствовало увеличению сохранности потомства на 3-6,3%, при этом деловой выход находится в пределах 140-150 козлят на 100 маток.

Проведенные учеными АГАУ исследования по оценке эффективности и определению оптимальной дозировки применения «Плантарума» лягут в основу регистрационного досье в целях последующей регистрации и вывода препарата на российский рынок.

«Плантарум» может применяться не только в козоводстве или овцеводстве, но и в скотоводстве в целом. У нашего препарата есть уникальная особенность, дающая ему преимущество по сравнению с импортными аналогами: в его состав входят селектированные штаммы микроорганизмов, которые присущи желудочно-кишечному тракту животных сибирского региона», — комментирует успех опытного испытания препарата один из его разработчиков — аспирант АГАУ Ирина Функ.

После регистрации разработка алтайских ученых даст возможность заменить импортные аналоги пробиотиков.

KoreaMed Synapse

1. Рабочая группа NIH HMP. Петерсон Дж., Гарджес С., Джованни М., Макиннес П., Ван Л. и др. Проект человеческого микробиома NIH. Геном Res. 2009 г.; 19:2317–2323.
2. Ллойд-Прайс Дж., Абу-Али Г., Хаттенхауэр К. Микробиом здорового человека. Геном Мед. 2016; 8:51.
3. Брубейкер Л., Вулф А.Дж. Новый мир мочевой микробиоты у женщин. Am J Obstet Gynecol. 2015 г.; 213: 644–649.
4. Арутчева А., Гарити Д., Саймон М., Шотт С., Фаро Дж., Симоес Дж.А. и соавт. Факторы защиты вагинальных лактобацилл.Am J Obstet Gynecol. 2001 г.; 185: 375–379.
5. Minardi D, d’Anzeo G, Cantoro D, Conti A, Muzzonigro G. Инфекции мочевыводящих путей у женщин: этиология и варианты лечения. Int J Gen Med. 2011 г.; 4: 333–343.

6. Консорциум по проектам микробиома человека. Основа для исследования микробиома человека. Природа. 2012 г.; 486: 215–221.

7. Аагард К., Петросино Дж., Кейтель В., Уотсон М., Катанчик Дж., Гарсия Н. и др. Стратегия проекта микробиома человека для всестороннего отбора проб микробиома человека и того, почему это важно.FASEB J. 2013; 27:1012–1022.
8. Пирс М.М., Хилт Э.Е., Розенфельд А.Б., Зиллиокс М.Дж., Томас-Уайт К., Фок С. и другие. Женский мочевой микробиом: сравнение женщин с ургентным недержанием мочи и без него. МБио. 2014; 5:e01283-14.
9. Брубейкер Л., Вулф А.Дж. Микробиота женской мочи, здоровье мочевыводящих путей и общие расстройства мочеиспускания. Энн Трансл Мед. 2017; 5:34.
10. Гарнер Ф., Малагелада Дж. Р. Кишечная флора в норме и при патологии. Ланцет. 2003 г.; 361: 512–519.
11. Льюис Д.А., Браун Р., Уильямс Дж., Уайт П., Якобсон С.К., Маркези Дж.Р. и другие.микробиом мочи человека; бактериальная ДНК в моче бессимптомных взрослых. Front Cell Infect Microbiol. 2013; 3:41.
12. Прайс Т.К., Дюна Т., Хилт Э.Е., Томас-Уайт К.Дж., Клитермес С., Бринкат С. и др. Клиническая культура мочи: усовершенствованные методы улучшают обнаружение клинически значимых микроорганизмов. Дж. Клин Микробиол. 2016; 54:1216–1222.
13. Сантьяго-Родригес ТМ, Ли М, Бонилья Н, Прайд ДТ. Виром мочи человека в связи с инфекциями мочевыводящих путей. Фронт микробиол.2015 г.; 6:14.
14. Fouts DE, Pieper R, Szpakowski S, Pohl H, Knoblach S, Suh MJ, et al. Интегрированное секвенирование 16S рДНК нового поколения и метапротеомика позволяют дифференцировать здоровый микробиом мочи от бессимптомной бактериурии при невропатическом мочевом пузыре, связанном с повреждением спинного мозга. J Transl Med. 2012 г.; 10:174.
15. Dong Q, Nelson DE, Toh E, Diao L, Gao X, Fortenberry JD, et al. Микробные сообщества в первой моче мужчин очень похожи на таковые в парных образцах уретральных мазков.ПЛОС Один. 2011 г.; 6:e19709.
16. Сиддики Х., Недербрагт А.Дж., Лагесен К., Джинссон С.Л., Якобсен К.С. Оценка разнообразия микробиоты женской мочи с помощью высокопроизводительного секвенирования ампликонов 16S рДНК. БМС микробиол. 2011 г.; 11:244.
17. Нельсон Д.Э., Ван Дер Пол Б., Донг К.В., Реванна К.В., Фан Б., Исваран С. и др. Характерные микробиомы мужской мочи ассоциируются с бессимптомной инфекцией, передающейся половым путем. ПЛОС Один. 2010 г.; 5:e14116.
18. Чжоу С., Бент С.Дж., Шнайдер М.Г., Дэвис С.С., Ислам М.Р., Форни Л.Дж.Характеристика вагинальных микробных сообществ у взрослых здоровых женщин с использованием независимых от культивирования методов. Микробиология. 2004 г.; 150: 2565–2573.

19. Manhart LE, Khosropour CM, Liu C, Gillespie CW, Depner K, Fiedler T, et al. Бактерии, ассоциированные с бактериальным вагинозом у мужчин: ассоциация Leptotrichia/Sneathia spp. при негонококковом уретрите. Секс Трансм Дис. 2013; 40:944–949.

20. Фредрикс Д.Н., Фидлер Т.Л., Марраццо Дж.М. Молекулярная идентификация бактерий, ассоциированных с бактериальным вагинозом.N Engl J Med. 2005 г.; 353: 1899–1911.
21. Teixeira GS, Carvalho FP, Arantes RM, Nunes AC, Moreira JL, Mendonca M, et al. Характеристики Lactobacillus и Gardnerella vaginalis у женщин с бактериальным вагинозом или без него и их взаимосвязь у гнотобиотических мышей. J Med Microbiol. 2012 г.; 61:1074–1081.
22. Де Бакер Э., Верхелст Р., Верстрален Х., Алкумбер М.А., Бертон Дж.П., Тагг Дж.Р. и др. Количественное определение с помощью ПЦР в реальном времени четырех вагинальных видов Lactobacillus, Gardnerella vaginalis и Atopobium vaginae указывает на обратную зависимость между L.gasseri и L. iners. БМС микробиол. 2007 г.; 7:115.
23. Паттерсон Дж.Л., Гирерд П.Х., Карджан Н.В., Джефферсон К.К. Влияние фенотипа биопленки на устойчивость Gardnerella vaginalis к перекиси водорода и молочной кислоте. Am J Obstet Gynecol. 2007 г.; 197:170.e1–170.e7.
24. Янулайтене М., Палиулите В., Гринцевичене С., Закаревичене Дж., Владисаускене А., Марцинкуте А. и др. Распространенность и распределение подгрупп Gardnerella vaginalis у женщин с бактериальным вагинозом и без него. BMC Infect Dis.2017; 17:394.
25. Castro J, Alves P, Sousa C, Cereija T, Franca A, Jefferson KK, et al. Использование модели биопленки in vitro для оценки потенциала вирулентности бактериального вагиноза или небактериального вагиноза изолятов Gardnerella vaginalis. Научный представитель 2015 г.; 5:11640.
26. Gottschick C, Deng ZL, Vital M, Masur C, Abels C, Pieper DH, et al. Микробиота мочи мужчин и женщин и ее изменения у женщин при бактериальном вагинозе и лечении антибиотиками. Микробиом. 2017; 5:99.
27.Клайн К.А., Льюис А.Л. Грамположительные уропатогены, полимикробная инфекция мочевыводящих путей и формирующаяся микробиота мочевыводящих путей. Микробиологический спектр. 2016; 4.
28. Акерман А.Л., Андерхилл Д.М. Микобиом мочевыводящих путей человека: потенциальная роль грибов в урологии. Энн Трансл Мед. 2017; 5:31.
29. Никель Дж. К., Стивенс А., Лэндис Дж. Р., Маллинз С., ван Боховен А., Люсия М. С. и др. Оценка микробиоты нижних мочевыводящих путей во время обострения симптомов у женщин с урологическим синдромом хронической тазовой боли: сетевое исследование MAPP.Дж Урол. 2016; 195: 356–362.
30. Лю Ф., Лин З., Сяо Ю., Ян Ц., Ван Б., Чжэн Л. и др. Изменения микробиоты мочи при сахарном диабете 2 типа с артериальной гипертензией и/или гиперлипидемией. Фронт Физиол. 2017; 8:126.
31. Karlsson M, Scherbak N, Reid G, Jass J. Lactobacillus rhamnosus GR-1 усиливает активацию NF-kappaB в стимулированных Escherichia coli клетках мочевого пузыря посредством TLR4. БМС микробиол. 2012 г.; 12:15.
32. Hutt P, Lapp E, Stsepetova J, Smidt I, Taelma H, Borovkova N, et al.Характеристика пробиотических свойств вагинальных штаммов лактобацилл человека. Microb Ecol Health Дис. 2016; 27:30484.
33. Сумати А.Х., Сарита Н.К. Ассоциация инфекции мочевыводящих путей у женщин с бактериальным вагинозом. J Glob Infect Dis. 2009 г.; 1: 151–152.

34. Ян Д.Х., Лу З., Су Дж.Р. Сравнение основных видов лактобактерий у здоровых женщин и женщин с бактериальным вагинозом. Чин Мед Дж (англ.). 2009 г.; 122:2748–2751.

35. Павлова С.И., Килич А.О., Килич С.С., Со Дж.С., Надер-Масиас М.Е., Симоес Дж.А., и соавт.Генетическое разнообразие вагинальных лактобацилл женщин разных стран на основе последовательностей генов 16S рРНК. J Appl Microbiol. 2002 г.; 92:451–459.

36. O’Hanlon DE, Moench TR, Cone RA. рН влагалища и микробицидная молочная кислота, когда в микробиоте преобладают лактобациллы. ПЛОС Один. 2013; 8:e80074.

37. Борис С., Суарес Дж. Э., Васкес Ф., Барбес С. Адгезия вагинальных лактобацилл человека к вагинальным эпителиальным клеткам и взаимодействие с уропатогенами. Заразить иммун. 1998 год; 66: 1985–1989.
38. Спербек Р.Р., Арвидсон К.Г. Ингибирование взаимодействий эпителиальных клеток Neisseria gonorrhoeae вагинальными видами Lactobacillus. Заразить иммун. 2008 г.; 76:3124–3130.
39. Velraeds MM, van der Mei HC, Reid G, Busscher HJ. Ингибирование начальной адгезии уропатогенных Enterococcus faecalis биосурфактантами из изолятов Lactobacillus. Appl Environ Microbiol. 1996 год; 62: 1958–1963.
40. Рид Г., МакГроарти Дж. А., Анготти Р., Кук Р. Л. Продукция ингибиторов Lactobacillus против Escherichia coli и способность к коагрегации с уропатогенами.Может J Microbiol. 1988 год; 34:344–351.

Анализ слюны на уровень Lactobacillus spp. и сопутствующие факторы как детерминанты кариеса зубов у детей начальной школы в городе Харар, восточная Эфиопия | BMC Pediatrics

  • Мулу В., Демили Т., Йимер М., Мешеша К., Абера Б. Кариес зубов и связанные с ним факторы у детей начальной школы в городе Бахр-Дар: перекрестное исследование. Примечания BMC Res. 2014;7:949.

    Артикул Google ученый

  • Всемирная организация здравоохранения.Здоровье полости рта. [В сети].; 2017 [по состоянию на 20 августа 2019 г. Доступно по ссылке: https://www.who.int/oral_health/disease_burden/global/en/.

  • Dimaisip-Nabuab J, Duijster D, Benzian H, Heinrich-Weltzien R, Homsavath A, Monse B, Sithan H, Stauf N, Susilawati S, Kromeyer-Hauschild K. Состояние питания, кариес и прорезывание зубов у детей : лонгитюдное исследование в Камбодже, Индонезии и Лаосе PDRBMC Pediatr 2018; 18(1): 300.

  • Всемирная стоматологическая федерация. Атлас здоровья полости рта.2 и изд. ПИИ, редактор. Брайтон: множество изданий; 2015.

  • Всемирная организация здравоохранения. Методы и источники данных ВОЗ для оценок глобального бремени болезней за 2000–2015 гг. Женева: Департамент информации, доказательств и исследований; 2017.

    Google ученый

  • RCdo A, Batista MJ, MPMR M, Cypriano S, MdaLR S. Тенденции кариеса зубов у детей дошкольного возраста в Indaiatuba, SP, Бразилия. Браз Дж. Оральные науки. 2014;13(1):1–5.

    Артикул Google ученый

  • Hoceini A, Khelil N, Ben-Yelles I, Mesli A, Ziouani S, Ghellai L, Aissaoui N, Nas F, Arab M. Факторы, связанные с кариесом, и бактериальный состав наддесневых бляшек у людей без кариеса и с активным кариесом Алжирский взрослые люди. Asian Pac J Trop Biomed. 2016;6(8):720–6.

    Артикул Google ученый

  • Айеле Ф.А., Тайе Б.В., Айеле Т.А., Гелайе К.А.Предикторы кариеса зубов у детей 7-14 лет в Северо-Западной Эфиопии: перекрестное исследование на базе сообщества. Здоровье полости рта BMC. 2013;13(1):7.

    Артикул Google ученый

  • Fung MHT, Wong MCM, Lo ECM, Chu CH. Кариес у детей раннего возраста: обзор литературы. J Oral Hyg Health. 2013;1:107.

    Google ученый

  • Ли М.О., Ли Э.Дж. Влияние характеристик подростков и здоровья полости рта на кариес зубов.Корейский J Health Serv Manag. 2018;12(2):101–12.

    Артикул Google ученый

  • Кота С.Б., АльФарадж Н.С.М., Рамдан Т.Х., Алсалам М.А., Аль Амир М.Дж., Алмузин З.М. Связь между диетой, диетическими привычками и гигиеной полости рта с возникновением и тяжестью кариеса у детей с аутизмом в городе Даммам, Саудовская Аравия. Открытый доступ Maced J Med Sci. 2018;6(6):1104–10.

    Артикул Google ученый

  • Hujoel PP, Hujoel ML, Kotsakis GA.Личная гигиена полости рта и кариес зубов: систематический обзор рандомизированных контролируемых исследований. Геродонтология. 2018;35(4):282–9.

    Артикул Google ученый

  • Ханс Р., Томас С., Гарла Б., Дагли Р., Ханс М. Влияние различных сладких напитков на рН слюны, скорость потока и скорость орального клиренса у взрослых. Научная. 2016;2016:5027283.

    Артикул Google ученый

  • Карабекироглу С., Унлю Н.Эффективность различных профилактических программ в отношении параметров кариеса у молодых людей с высоким риском развития кариеса. Международный J Dent. 2017;2017:7189270.

    Артикул КАС Google ученый

  • Центр контроля и профилактики заболеваний. Школьные программы стоматологических герметиков. [В сети].; 2016 [цитировано 3 ноября 2017 г. «https://www.cdc.gov/oralhealth/dental_sealant_program/index.htm».

  • Центральное статистическое агентство (CSA) [Эфиопия] и ICF.Медико-демографическое обследование Эфиопии, 2016 г. Аддис-Абеба и Роквилл, штат Мэриленд: CSA и ICF; 2016.

    Google ученый

  • Всемирная организация здравоохранения. Основные методы обследования полости рта. 5-е изд. Женева: библиотечная каталогизация ВОЗ для опубликованных данных; 2013.

    Google ученый

  • Хенсон Б.С., Вонг Д.Т. Сбор, хранение и обработка образцов слюны для дальнейшего молекулярного применения.Методы Мол Биол. 2010; 666: 21–30.

    Артикул Google ученый

  • Сентхилкумар Б., Зотансанга, Сенбагам Д., Сентхилкумар Н., Гурусубраманиам Г. Практическая микробиология. Лабораторное руководство. 1-е изд. Нью-Дели: Издательская корпорация Panima; 2014. https://doi.org/10.13140/2.1.2667.6163.

    Книга Google ученый

  • Ахирвар С.С., Гупта М.К., Гупта Г., Сингх В.Скрининг, выделение и идентификация видов Lactobacillus из кариеса зубов у детей. Int J Curr Microbiol App Sci. 2017;6(1):497–503.

    Артикул КАС Google ученый

  • Нитья К., Сенбагам Д., Сентхилкумар Б., Удхаяшри Н., Гурусами Р. Характеристика бактериоцина, продуцирующего молочнокислые бактерии, и его применение в качестве пищевого консерванта. Afr J Microbiol Res. 2012;6(6):1138–46.

    Артикул КАС Google ученый

  • Бернетт Д., Аронсон Дж., Асгари Р.Состояние здоровья полости рта, знания, отношение и поведение маргинализированных детей в Аддис-Абебе, Эфиопия. J Детское здравоохранение. 2016;20(2):252–61.

    Артикул Google ученый

  • Teshome A, Yitayeh A, Gizachew M. Распространенность кариеса зубов и связанных с ним факторов среди учащихся начальной школы Finote Selam в возрасте 12-20 лет, город Finote Selam, Эфиопия. ОНДМ. 2016;15:36–41.

    Google ученый

  • Андегиоргиш А.К., Вельдемариам Б.В., Кифле М.М., Мебрахту Ф.М., Зевде Х.К., Тевелде М.Г., Хуссен М.Х., Цегай В.К.Распространенность кариеса зубов и связанных с ним факторов среди 12-летних учащихся в Эритрее. Здоровье полости рта BMC. 2017;17(1):169.

    Артикул Google ученый

  • Фергус СЕ. Распространенность кариеса и опыт 12-летних детей в монастыре Монтсеррат. West Indian Med J. 2010; 59 (5): 573–7.

    ПабМед КАС Google ученый

  • Аль-Дарвиш М., Эль Ансари В., Бенер А.Распространенность кариеса среди детей 12-14 лет в Катаре. Саудовская Дент Дж. 2014; 26 (3): 115–25.

    Артикул Google ученый

  • Софола О.О., Фолаян М.О., Огинни А.Б. Изменения в распространенности кариеса зубов у детей младшего школьного возраста в штате Лагос, Нигерия. Нигер J Clin Pract. 2014;17(2):127–33.

    Артикул КАС Google ученый

  • Тагельсир А., Хогли А.Е., Нурелхуда Н.М.Здоровье полости рта слабовидящих школьников в штате Хартум, Судан. Здоровье полости рта BMC. 2013;13(1):33.

    Артикул Google ученый

  • Фукуда Х., Огада К.Н., Кихара Э., Вагайю Э.Г., Хаяши Ю. Состояние здоровья полости рта у 12-летних детей в сельской кенийской общине. Дж. Дент Здоровье полости рта. 2014; 1:1–5.

    Артикул Google ученый

  • Джексон С.Л., Ванн В.Ф. младший, Котч Дж.Б., Пахел Б.Т., Ли Дж.Й.Влияние плохой гигиены полости рта на посещаемость и успеваемость детей в школе. Am J Общественное здравоохранение. 2011;101(10):1900–6.

    Артикул Google ученый

  • Сачдев Дж., Бансал К., Чопра Р. Влияние комплексной стоматологической реабилитации на параметры роста детей с тяжелым кариесом в раннем детстве. Intl J Clin Pediatr dent. 2016;9(1):15.

    Артикул Google ученый

  • Давани Н., Нисар Н., Хан Н., Сайед С., Танвир Н.Распространенность и факторы, связанные с кариесом зубов, среди детей дошкольного возраста в городе Саддер, Карачи, Пакистан: перекрестное исследование. Здоровье полости рта BMC. 2012;12:59.

    Артикул Google ученый

  • Шейхам А., Джеймс В.П. Диета и кариес зубов: вновь подчеркнута ключевая роль свободных сахаров. Джей Дент Рез. 2015;94(10):1341–1347.

    Артикул КАС Google ученый

  • Пиват С., Теанпайсан Р., Титасомакул А., Термонтри А., Дален Г. видов и генотипов Lactobacillus , связанных с кариесом зубов у детей дошкольного возраста в Таиланде. Мол Оральный микробиол. 2010;25(2):157–64.

    Артикул КАС Google ученый

  • Eşian D, Man A, Burlibasa L, Burlibasa M, Perianu MV, Bică CI. Уровень Streptococcus mutans и Lactobacillus spp. связаны с высоким риском развития кариеса. Ром Биотехнолог Летт. 2017;22(2):12496–503.

    Google ученый

  • Баирва Р., Гупта П., Гупта В.К., Шривастава Б.Традиционные лекарственные растения: использование в гигиене полости рта. Int J Pharm Chem Sci. 2012;1(4):1529–38.

    Google ученый

  • Маро Д., Роберт Х., Мачибья Ф., Кахабука К., Мугонзибва Э.А. Предыдущая зубная боль, посещение стоматолога и наличие кариеса у детей младшего школьного возраста в Дарес Салам. Танц Дент Дж. 2012; 17 (2): 50–5.

    Google ученый

  • Апоптоз вагинальных эпителиальных клеток в клинических образцах от женщин с диагностированным бактериальным вагинозом

    Участники

    Микробиологическая диагностическая служба в университетской больнице Санта-Мария-делла-Мизерикордия, Перуджа (Италия) с ноября 2018 года по июль 2019 года, были случайным образом включены в это исследование.Критерии исключения: пациенты вне возрастного диапазона 19–50 лет, пациенты с перевязкой маточных труб или гистерэктомией в анамнезе и женщины с Chlamydia trachomatis , Neisseria gonorrhoeae , Trichomonas vaginalis , Streptococcus agalactiae 6

  • ,
  • Saccharomyces cerevisiae, Candida spp. или ВИЧ-инфекции 19 . Лица были исключены из исследования, если они получали системную или местную антибиотико/противомикробную терапию в течение предыдущих 2 месяцев, имели менструацию на момент обследования, использовали внутриматочную контрацепцию или имели в анамнезе заболевания, передающиеся половым путем 1 .Субъекты, включенные в это исследование, были разделены на две группы: 34 женщины с БВ и 20 здоровых женщин (рис. 1а). Диагноз БВ был основан на критериях Amsel и Nugent 1,8,19,26 . Перед включением в исследование все пациентки заполняли анкету с указанием состояния их здоровья и симптомов вагинального заболевания. Все участники предоставили письменное информированное согласие в соответствии с Хельсинкской декларацией. Для всего исследования было получено одобрение местного этического комитета CEAS (Comitato Etico delle Aziende Sanitarie, Умбрия, Италия) (MICROCA).Все методы были выполнены в соответствии с соответствующими руководящими принципами и правилами.

    Сбор проб

    Три вагинальных мазка были взяты у каждой женщины, участвовавшей в этом исследовании. Один тампон использовали для измерения pH с помощью полосок pH-Fix (Macherey-Nagel GmbH & Co. KG, Дюрен, Германия).

    Один тампон смочили 1 мл физиологического раствора. Определенный объем этого образца культивировали на агаре BD Columbia CNA Agar, содержащем 5% овечьей крови (Becton Dickinson, Нью-Джерси, США). Для Г.vaginalis , проводили масс-спектрометрический анализ (MALDI-TOF MS) (Bruker Daltonik GmbH, Бремен, Германия). Оставшийся объем образца использовали для окрашивания по Граму (критерии Ньюджента) для диагностики БВ. Последний тампон пропитывали 1 мл физиологического раствора и встряхивали не менее одной минуты. Около 100 мкл образца исследовали под световым микроскопом (Olympus, Милан, Италия) для оценки присутствия нейтрофилов (PMN) и эксфолиации EC. Количество PMN и EC подсчитывали в четырех полях при увеличении ×400 и выражали как среднее количество PMN или EC/поле, как описано ранее 10,19,27 .

    Оставшийся образец (900 мкл) центрифугировали при 1600 об/мин в течение 10 мин, а клеточную фракцию использовали для проточного цитометрического анализа или для оценки повреждения ЭК или апоптоза ЭК.

    Из-за ограниченного количества ЭК в наших образцах мы не смогли выполнить все анализы для всех образцов. На каждом рисунке мы указали количество использованных BV и здоровых образцов.

    MALDI-TOF MS

    Для MALDI-TOF MS бактерии выращивали в культуре мазка, как описано выше, и бактериальные экстракты готовили, как описано ранее 28,29 .Вкратце, клетки из одной колонии свежей культуры вагинальных образцов использовали для приготовления образцов в соответствии с процедурой экстракции профиля микроорганизмов этанолом/муравьиной кислотой в соответствии с инструкциями производителя. После центрифугирования на максимальной скорости в течение 2 мин 1 мкл супернатанта, содержащего бактериальный экстракт, высушивали после нанесения на него 2 мкл химической матрицы (насыщенный раствор α-циано-4-гидроксикоричной кислоты в 50% ацетонитриле). /2,5% трифторуксусной кислоты) на полированной стальной мишени MALDI.Затем образцы обрабатывали с помощью масс-спектрометра microflex LT (Bruker Daltonik GmbH, Бремен, Германия), оснащенного азотным лазером с частотой 20 Гц. Спектры записывали в положительном линейном режиме, как описано ранее 30 .

    Проточный цитометрический анализ

    Суммарные клеточные фракции, полученные из выбранных вагинальных мазков, фиксировали в 1,5% формалине в течение 5  мин при комнатной температуре, промывали и анализировали с помощью проточной цитометрии (FACSCalibur, BD Biosciences, Нью-Джерси, США) для определения FSC /SSC вагинальный параметр EC, как сообщалось ранее 10,31 , или инкубация в течение 20 минут при комнатной температуре в темноте с FITC-конъюгированным мышиным моноклональным антителом к ​​молекуле адгезии эпителиальных клеток человека (EpCAM, CD326) (IgG2 ak ) (0.5 мкг/тест; eBioscience, Thermo Fisher Scientific, Калифорния, США), или пермеабилизированы абсолютным метанолом (500 мкл/10 6 клеток) в течение 10 минут на льду, а затем инкубированы с конъюгированными с FITC мышиными моноклональными антителами к p-IκBα человека (IgG 2bk ) или человеческий c-Fos (IgG 1k ) (оба разведения 1:50; Santa Cruz Biotechnology, Калифорния, США) или PE-конъюгированные кроличьи моноклональные антитела к активной каспазе-3 человека (IgG) (5 мкл/тест , BD Pharmingen TM , Allschwil, Швейцария).После инкубации клетки промывали флуоресцеиновым буфером и анализировали 10 000 событий с помощью проточной цитометрии. Более 98% клеток, содержащихся в воротах, были EpCAM-позитивными. Изотипические контроли, включая IgG 2ak мыши, IgG 2bk и IgG 1k , и IgG кролика были приобретены у Novus Biologicals (Колорадо, США). PE-конъюгированный овечий антимышиный IgG (целая молекула) и FITC-конъюгированный мышиный антикроличий IgG (цельная молекула) были приобретены у компаний Sigma-Aldrich (Мюнхен, Германия) и Santa Cruz Biotechnology (Калифорния, США) соответственно.Аутофлуоресценцию оценивали с использованием необработанных клеток. Специфическую флуоресценцию оценивали путем сравнения с результатами для специфического изотипического контроля мыши. Данные выражали как процент положительных клеток.

    Анализ повреждения ЭК

    Подсчитывали количество ЭК в выбранных вагинальных образцах, доводили до 1 × 10 6 /мл в фосфатно-солевом буфере (PBS) и культивировали в течение 18 часов при 37 °C при 5% CO 2 в 96-луночных титрационных микропланшетах (100 мкл/лунку). Впоследствии повреждение ЭК определяли по высвобождению лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в окружающую среду с использованием набора для обнаружения цитотоксичности Pierce LDH (Thermo Fisher Scientific, Калифорния, США).Для каждого теста ЭК от одного здорового донора использовали в качестве отрицательного контроля (ЭК, культивированные только в PBS для спонтанной активности ЛДГ) и положительного контроля (ЭК + лизисный буфер в PBS для максимальной активности ЛДГ). Активность ЛДГ измеряли спектрофотометрически при 492 нм. Процент поврежденных ЭК влагалища рассчитывали следующим образом: (активность ЛДГ вагинальных клеток – спонтанная активность ЛДГ/максимальная активность ЛДГ – спонтанная активность ЛДГ) × 100 32 .

    Оценка апоптоза путем окрашивания йодидом пропидия

    Процент вагинальных ЭК, подвергшихся апоптозу, определяли путем окрашивания йодидом пропидия (PI) (50 мкг/мл; Sigma-Aldrich, Мюнхен, Германия) в соответствии с инструкциями производителя.Вкратце, вагинальные ЭК центрифугировали при 1600 об/мин в течение 10 мин, суспендировали в гипотоническом растворе PI и выдерживали в течение 1 ч в темноте при комнатной температуре. Флуоресценцию PI отдельных ядер измеряли с помощью проточной цитометрии, а процент апоптотических ядер вагинальных ЭК рассчитывали с использованием исследовательского программного обеспечения FACScan (BD Biosciences, Нью-Джерси, США), как описано ранее 33,34 .

    Микробные штаммы и условия роста

    G. vaginalis клинических изолятов были получены из вагинальных мазков 3 женщин с БВ, включенных в это исследование в отделении микробиологии больницы Санта-Мария-делла-Мизерикордия в Перудже.Эти тампоны использовали для инокуляции чашек с агаром, селективным к гарднереллам (GSA), содержащим 5% человеческой крови (Becton Dickinson, Нью-Джерси, США). Планшеты инкубировали в анаэробных условиях при 37 °С в течение 24–48 часов, выделяли β-гемолитические колонии и штаммы-кандидаты G. vaginalis идентифицировали с помощью масс-спектрометрии (MALDI-TOF MS). Клинические изоляты G. vaginalis затем культивировали в бульоне для инфузии мозга и сердца (BHI) и инкубировали в анаэробных условиях при 37 °C.

    Формирование биопленки

    Биопленки выращивали с использованием 96-луночных планшетов.Ночные культуры трех клинических изолятов G. vaginalis , полученных от женщин с БВ, доводили до концентрации 1×10 8 КОЕ/мл в sBHI (бульон BHI с добавлением 2% желатина, 1% дрожжевого экстракта, 0,1% растворимого крахмала и 0,25% мальтозы), и образцы (100 мкл) переносили в каждую лунку планшета. Затем планшеты инкубировали в течение 48 ч при 37°С в 10% СО 2 . Чтобы оценить влияние периодического роста с подпиткой на образование биопленки (48 часов), культуральную среду заменяли свежей через 24 часа роста.

    Количественное определение биопленки

    Биомассу биопленки количественно определяли с использованием окрашивания кристаллическим фиолетовым (CV), как описано ранее 35,36 . CV представляет собой основной краситель, который связывается с отрицательно заряженными поверхностными молекулами и полисахаридами внеклеточного матрикса. После формирования биопленки (48 ч) биопленку дважды промывали 200 мкл PBS и фиксировали 100 мкл метанола. Через 15 мин супернатанты удаляли, а планшет сушили на воздухе. Затем биопленки окрашивали 100 мкл 0.5% CV в течение 20 мин. Затем планшеты дважды промывали 200 мкл PBS для удаления избытка CV. Наконец, CV солюбилизировали добавлением 150 мкл 33% уксусной кислоты на лунку. Оптическую плотность (ОП) при 590 нм измеряли с помощью 96-луночного считывающего устройства для микропланшетов (Tecan, Маннедорф, Швейцария).

    Оценка апоптоза путем окрашивания PI в модели

    ex vivo

    Вагинальные образцы от 9 здоровых женщин (без BV) трижды промывали PBS при 1000 об/мин в течение 5 минут для устранения большинства комменсальных бактерий ( Lactobacillus spp. .). Затем подсчитывали вагинальные ЭК и доводили их концентрацию до 2×10 5 /мл в среде RPMI 1640 с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS). Клетки культивировали в течение 18 ч при 37°C в атмосфере 5% CO 2 в 96-луночных титрационных микропланшетах (100 мкл/лунку) с циклогексимидом (CHX; 100 мкг/мл) или без него 37 или G. vaginalis клинический изолят (2×10 5 /мл или 2×10 6 /мл в бульоне BHI, 100  мкл/лунка). Процент вагинальных ЭК, подвергшихся апоптозу, определяли количественно через 0 и 18 ч после окрашивания PI, как описано ранее 33,34 .В течение инкубационного периода антибиотики в среду не добавляли.

    Статистический анализ

    Данные были представлены в виде среднего ± стандартная ошибка среднего (SEM) из трех повторных выборок или в виде диаграммы с медианой и 25 th и 75 th процентилей, в которых все женщины были идентифицированы точками . Программное обеспечение GraphPad Prism 7.0 использовалось для статистического анализа и проверки нормального распределения. Для оценки корреляции между двумя переменными использовали непараметрический корреляционный тест Спирмена.Данные были проанализированы с помощью ANOVA с последующим апостериорным тестом Бонферрони или тестом Крускала-Уоллиса с последующим апостериорным сравнительным тестом Данна или U-критерием Манна-Уитни, как показано на каждом рисунке. Значения P  < 0,05 считались статистически значимыми.

    %PDF-1.7 % 175 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 175 75 0000000016 00000 н 0000002580 00000 н 0000002760 00000 н 0000002818 00000 н 0000002854 00000 н 0000004037 00000 н 0000004064 00000 н 0000004203 00000 н 0000004346 00000 н 0000004811 00000 н 0000005597 00000 н 0000005692 00000 н 0000006116 00000 н 0000006534 00000 н 0000007169 00000 н 0000007838 00000 н 0000007952 00000 н 0000007979 00000 н 0000008016 00000 н 0000008704 00000 н 0000008818 00000 н 0000008930 00000 н 0000009194 00000 н 0000009635 00000 н 0000010173 00000 н 0000011248 00000 н 0000011666 00000 н 0000012069 00000 н 0000012479 00000 н 0000012887 00000 н 0000013321 00000 н 0000013586 00000 н 0000013853 00000 н 0000014781 00000 н 0000015550 00000 н 0000016310 00000 н 0000016727 00000 н 0000017102 00000 н 0000017542 00000 н 0000018374 00000 н 0000019389 00000 н 0000019820 00000 н 0000020709 00000 н 0000021671 00000 н 0000024321 00000 н 0000028406 00000 н 0000033524 00000 н 0000039344 00000 н 0000042288 00000 н 0000042358 00000 н 0000042475 00000 н 0000057481 00000 н 0000057759 00000 н 0000058312 00000 н 0000064889 00000 н 0000069671 00000 н 0000072950 00000 н 0000073336 00000 н 0000073801 00000 н 0000078204 00000 н 0000078473 00000 н 0000078861 00000 н 0000079270 00000 н 0000084952 00000 н 0000085218 00000 н 0000085618 00000 н 0000086745 00000 н 0000086784 00000 н 0000087789 00000 н 0000087828 00000 н 00000

  • 00000 н 00000

    00000 н 00000 00000 н 00000 00000 н 0000001796 00000 н трейлер ]/предыдущая 186303>> startxref 0 %%EOF 249 0 объект >поток hb«b« Ȁ

    Микроорганизмы | Бесплатный полнотекстовый | Пробиотик Lactobacillus sp.Штаммы ингибируют рост, адгезию, образование биопленки и экспрессию генов Gardnerella vaginalis, вызывающей бактериальный вагиноз

    1. Введение

    Бактериальный вагиноз (БВ) является распространенной инфекцией женских половых путей [1]. На основании критериев Amsel распространенность БВ составляла до 8,7% в Пекине (2010 г.), 5,9% в Шаньдуне (2004 г.) и 15,4% в Сычуани (2004 г.) [2]. БВ характеризуется заменой полезных лактобацилл и увеличением числа анаэробных патогенных бактерий, таких как Gardnerella vaginalis [3,4,5].G.vaginalis постулируется как первичная патогенная бактерия, которая прикрепляется к вагинальному эпителию, где для развития БВ требуется помощь других анаэробов [6]. В настоящее время принято считать, что биопленки при БВ тесно связаны с G. vaginalis [7], а биопленки, образующие G. vaginalis на вагинальном эпителии, способствуют низкой частоте излечения при антимикробной терапии [8]. Факторы вирулентности G. vaginalis включают вагинолизин и сиалидазу (кодируемые vly и sld соответственно), которые способствуют формированию БВ [9].Вагинолизин является членом семейства холестеринзависимых цитолизинов и действует как гемолизин [10], создавая поры, которые изменяют целостность и форму клеток, что, как считается, нарушает местный врожденный иммунитет и, таким образом, способствует сохранению БВ [11]. Сиалидаза (также известная как нейраминидаза) представляет собой фермент, который отщепляет сиаловую кислоту от терминальных гликанов гликопротеинов и также присутствует в цервиковагинальной жидкости [12]. Активность сиалидазы является предполагаемым биомаркером БВ [13] и была независимо связана с неблагоприятными исходами беременности, включая внутриутробные инфекции и преждевременные роды [14].Клиндамицин и метронидазол являются стандартными препаратами для БВ [15]. Однако их использование связано с антибиотикорезистентностью и высоким уровнем рецидивов инфекции [15,16]. Биопленки анаэробных патогенных бактерий во влагалищных микроорганизмах могут быть причиной неэффективности лечения и рецидивов БВ [17]. Адъювантная терапия пробиотиками была рекомендована экспертами, и в некоторых исследованиях изучалась роль пробиотиков в лечении БВ, включая использование пробиотиков отдельно и в сочетании с антибиотиками [16].Недавнее исследование фазы 2b показало, что Lactobacillus crispatus CTV-05 (Lactin-V) значительно снижает рецидив БВ [18]. Lactobacillus sp. является доминирующим видом примерно в 70 % вагин (26,2 % с L. crispatus, 6,3 % с Lactobacillus gasseri, 5,3 % с Lactobacillus jensenii и 34,1 % с Lactobacillus iners у белых/азиатских женщин) и может способствовать здоровью влагалища, подавляя риск БВ [19]. Распространенность этих типов сообществ зависит от расы и этнической принадлежности, при этом чернокожие и латиноамериканские женщины чаще являются носителями L.iners-доминантные и разнообразные сообщества, чем белые женщины, которые чаще принимают сообщества с доминированием L. crispatus [20]. L. crispatus может репрессировать экспрессию генов vly и sld у G. vaginalis [9, 21], а Lactobacillus reuteri RC-14 вызывает наибольшее вытеснение G. vaginalis в биопленке [22]. Было подтверждено, что Lactiplantibacillus plantarum 59 и Lactobacillus fermentum 137 проявляют противовоспалительное действие в отношении G. vaginalis и Candida albicans и способны влиять на сигнальный путь ядерного фактора-kappaB [23].Лпб. plantarum ZX27 — типичный пробиотический микроорганизм, обнаруженный в старом йогурте, и ранее мы продемонстрировали его антимикробное действие в отношении G. vaginalis и Escherichia coli [24]. Однако на сегодняшний день ни одно исследование не исследовало антибиопленочный эффект Lpb. plantarum против G. vaginalis, и связанные с этим механизмы остаются неизвестными.

    Соответственно, в настоящей работе мы исследовали функции двух Lpb. plantarum (Lpb. plantarum ZX27 и Lpb. plantarum ATCC 14917) и один коммерческий штамм молочнокислых бактерий (LAB) (L.delbrueckii DM8909) и сравнили пробиотики на основе их антиадгезионной, кокультуральной и антибиопленочной активности в отношении G. vaginalis. Мы дополнительно выяснили возможные механизмы, оценив экспрессию генов связанных параметров, включая факторы вирулентности, эпителиальную адгезию, образование биопленок, метаболизм и устойчивость к противомикробным препаратам G. vaginalis. Наконец, мы оценили противовоспалительную активность пробиотиков в отношении G. vaginalis и окислительного стресса (ОС).

    4.Обсуждение

    BV является одним из наиболее распространенных заболеваний влагалища у женщин детородного возраста во всем мире. Оптимальная микробиота влагалища представляет собой сбалансированную смесь из более чем 250 видов бактерий [37]. При определенных условиях изменения микробиоты влагалища всегда сопровождаются снижением Lactobacillus sp. и чрезмерный рост анаэробных бактерий. G. vaginalis вносит основной вклад в БВ из-за факторов вирулентности, включая вагинолизин и сиалидазу [9,13]. лактобактерии сп. было доказано, что они эффективно лечат БВ и уменьшают его рецидивы за счет восстановления микробиоты влагалища [19,37,38,39,40].лактобактерии сп. проявляют антибактериальную активность по-разному [25]. В настоящем исследовании мы оценили пробиотическую способность и противовоспалительное действие трех лактобацилл-кандидатов, а также пути, связанные с адгезией G. vaginalis, образованием биопленки и экспрессией генов. L. delbrueckii DM8909 был коммерческим штаммом, выделенным из Dingjunsheng (живая капсула Lactobacillus для вагинального применения; Wanze Shuangqi). Наше предыдущее исследование подтвердило Lpb. plantarum ZX27 анти-G. vaginalis [24], а в этом отчете Lpb.plantarum ATCC14917 использовали в качестве контроля Lpb. plantarum ZX27. Сначала мы сравнили основные свойства трех лактобацилл. Способность к аутоагрегации является решающим фактором, позволяющим пробиотическим штаммам образовывать флокулы в неблагоприятных условиях [41]. Два лпб. plantarum, выделенные в результате ферментации какао, показали умеренные значения аутоагрегации 33,44% и 29,23% [25], а Yanfeng et al. [42] сообщили о 15 Lpb. plantarum, демонстрирующие значения автоагрегации в диапазоне от 24,83% до 33.57%. В настоящем исследовании L. delbrueckii DM8909 продемонстрировал заметную способность к аутоагрегации до 51,5%, тогда как Lpb. plantarum ATCC14917 и ZX27 продемонстрировали более низкую емкость на 11,65% и 8,1% соответственно. Вполне вероятно, что возможности автоагрегации двух Lpb. plantarum в этом исследовании уступали тем, о которых сообщалось ранее, из-за разных оцениваемых периодов времени. Однако у DM8909 был более низкий показатель MATH (42). Кроме того, мы оценили способность трех штаммов к адгезии к клеткам HeLa при насыщении (более 1000 штаммов на одну клетку HeLa, 10 9 КОЕ Lactobacillus sp.штаммы покрывали 10 6 клеток HeLa). Количество Lactobacillus sp. к клеткам HeLa указывало на максимальное количество Lactobacillus sp. на одну клетку (>100), что позволяет предположить, что все три штамма обладали заметными адгезивными свойствами. Кроме того, ZX27 продемонстрировал лучшую выживаемость при окислительном стрессе, и результаты показывают значительно повышенную устойчивость к 0,01% H 2 O 2 по сравнению с ATCC14917. Петрова и др. [27] протестировали три вагинальных пробиотика Lactobacillus sp.и обнаружили показатели выживаемости Lactobacillus rhamnosus GG, L. rhamnosus GR-1 и L. rhamnosus LC705 в 0,1% (об./об.) H 2 O 2 в диапазоне от 1,8% до 8,7%. Кроме того, мы обнаружили, что пробиотические свойства были высоко штаммоспецифичными, при этом ZX27 проявлял умеренные свойства гидрофобности и адгезии. Бактериальная колонизация и адгезия, вероятно, зависят от аутоагрегации [3]. Хотя ZX27 демонстрировал относительно низкую автоагрегацию, он демонстрировал более быстрый рост и большее количество КОЕ в конце ферментации (12 ч) (4 × 10 9 КОЕ/мл) по сравнению с DM8909 (5 × 10 8 КОЕ). /мл) (дополнительный рисунок S2).Оценка SCFAs и молочной кислоты в CFS ZX27 показала, что он производит самое высокое содержание молочной кислоты (на 8,8% выше, чем DM8909), пропионовой кислоты, масляной кислоты, изомасляной кислоты и валериановой кислоты. Низкий кислый рН обычно считается основным механизмом поддержания состава здоровой вагинальной микрофлоры [43]. Кроме того, БВ характеризуется резкой потерей молочной кислоты и более высокими концентрациями смешанных SCFAs, включая ацетат, пропионат, бутират и сукцинат [44].В настоящем исследовании мы обнаружили, что ZX27 является более подходящим кандидатом для терапии БВ, поскольку этот штамм продуцирует более высокие концентрации пропионовой кислоты, масляной кислоты, изомасляной кислоты, валериановой кислоты и молочной кислоты, чем DM8909. В тесте на коагрегацию DM8909 и ZX27 имели значительно более высокую способность к коагрегации с G. vaginalis, чем ATCC14917 (рис. 1А). Кроме того, наблюдаемая коагрегация с G. vaginalis в настоящем исследовании (0,40–7,27%) была ниже, чем в предыдущих отчетах (43.15–44,61%) [25]. Эксперименты по совместному культивированию показали, что исходное содержание Lactobacillus sp. влияет на ингибирующую способность. При содержании 10 7 КОЕ/мл все три лактобациллы эффективно ингибировали рост G. vaginalis (степень ингибирования >98%) (рис. 1Б-Г). Эти результаты согласуются с результатами других исследований, включая Lpb. plantarum Os13 и Lpb. plantarum Kor14 ингибирование роста Listeria monocytogenes, E. coli и Salmonella enterica серовара Enteritidis в разное время с начальным Lactobacillus sp.содержание 10 7 КОЕ/мл [45]. Кроме того, Lactobacillus johnsonii LJ202 ингибировала рост S. enterica серовара Enteritidis DMST7106 в исследовании совместного культивирования [46], а в другом исследовании сообщалось, что 4-часовое совместное культивирование с Lactobacillus gasseri устраняло G. vaginalis и Prevotella bivia [47]. . Кроме того, два коммерчески доступных пробиотических штамма (L. rhamnosus HN001 и Lactobacillus acidophilus GLA-14, отдельно или в комбинации (пробиотическая смесь Respecta)) ингибируют рост четырех различных патогенов, ответственных как за БВ (G.vaginalis и Atopobium vaginae) и аэробный вагинит (Staphylococcus aureus и E. coli) в совместных культурах [48]. Кроме того, Лпб. plantarum 86 и L. fermentum AI2 ингибируют рост E. coli NG 502121 и S. aureus AY 507047 после совместного культивирования [49]. Мы обнаружили, что Lactobacillus sp. ингибировал прилипание G. vaginalis, когда клетки HeLa были предварительно покрыты Lactobacillus sp. (Рисунок 1E) и ATCC14917, демонстрируя самое сильное ингибирование для предотвращения прилипания G. vaginalis. Этот результат контрастирует с сообщениями, указывающими на плохую адгезию ATCC14917 к клеткам HeLa (таблица 1).Более сильная адгезивная способность ATCC14917 может быть одним из возможных объяснений, а плохая способность ATCC14917 к агрегации с G. vaginalis может объяснить более высокую скорость ингибирования адгезии этого штамма Lactobacillus (рис. 1A, E). При более низком уровне Lactobacillus sp. концентрации 10 5 КОЕ/мл, G. vaginalis показал хороший рост только в совместной культуре с ATCC14917. Это может быть связано с плохой коагрегационной способностью ATCC14917 с G. vaginalis (рис. 1А, С). Плохая коагрегационная способность Lactobacillus привела к слабой антипатогенной способности по сравнению с низким числом пробиотиков, но обеспечила более сильную защиту слизистой оболочки в тесте на адгезию.Предыдущее исследование показало, что L. crispatus значительно ингибирует прилипание G. vaginalis [21], а Lactobacillus sp. были способны исключать и вытеснять патогены мочевыводящих путей из клеток SV-HUC-1 [50]. Кроме того, Лю и соавт. [51] обнаружили, что Lpb. plantarum CCFM 233 и Lpb. plantarum CCFM 231 сильно препятствовал адгезии и инвазии клеточных линий HT-29 энтероинвазивной E. coli. В дополнение к противомикробной активности трех лактобацилл мы обнаружили, что их соответствующие CFS проявляли антибиопленочную активность против G.вагинальный. Мария и др. [52] сообщили, что лектиноподобный белок 1 в L. rhamnosus GR-1 ингибирует адгезию и образование биопленки в ключевом урогенитальном патогене E. coli UTI89. В дополнение к его активности против образования биопленки мы обнаружили, что CFS разрушает биопленку G. vaginalis. Это было подтверждено предыдущим исследованием, показывающим, что L. rhamnosus GR-1 и L. reuteri RC-14 проникают в биопленки G. vaginalis и вызывают гибель бактериальных клеток [53]. Биопленки G. vaginalis выдерживают в 5 и 4-8 раз более высокие концентрации H 2 O 2 и молочной кислоты соответственно, чем планктонные культуры [53].В настоящем исследовании мы продемонстрировали, что Lactobacillus sp. были способны устранять биопленку и эффективно убивать G. vaginalis. Чтобы исследовать механизм, с помощью которого Lactobacillus sp. противодействует G. vaginalis, мы оценили экспрессию соответствующих генов, кодирующих факторы вирулентности, и их связь с адгезией, образованием биопленок, метаболизмом и устойчивостью к противомикробным препаратам (таблица 3). Гены vly и sld кодируют вагинолизин и сиалидазу, которые являются основными патогенными факторами G. vaginalis.Мы обнаружили, что экспрессия vly и sld подавлялась как в планктонных клетках, так и в клетках биопленки с помощью CFS ZX27, что указывает на то, что Lactobacillus sp. CFS влияет на факторы вирулентности, продуцируемые G. vaginalis. Понятно, что Lactobacillus sp. метаболиты влияли на экспрессию патогенных генов. Предыдущее исследование показало, что L. crispatus напрямую снижает экспрессию vly в G. vaginalis UM241, BV-положительном штамме [9]. Кроме того, воздействие CFS снижало экспрессию pat, который кодирует фибрил-ассоциированный белок (flp) семейства TadE/G-подобного белка сборки пилуса и может играть важную роль в его адгезии к вагинальным эпителиальным клеткам [54].Эти данные свидетельствуют о том, что Lactobacillus sp. CFS может уменьшить упаковку ворсинок у G. vaginalis, чтобы подавить адгезию. Деконволюционная микроскопия показала изменения структуры и жизнеспособности биопленок в присутствии L. reuteri RC-14, сопровождающиеся потерей плотных стручков биопленок гарднерелл [22]. Ген gtf кодирует гликозилтрансферазу, которая, вероятно, необходима для биосинтеза экзополисахарида и имеет решающее значение для образования биопленки [54]. За исключением DM8909, мы обнаружили, что CFS снижает экспрессию gtf в G.вагинальный. Гены stp, atm и itm G. vaginalis участвуют в метаболизме углеводов, аминокислот и ионов соответственно (функции этих трех генов указаны в дополнительной таблице S1). В настоящем исследовании мы обнаружили, что ZX27 CFS снижает экспрессию этих генов, предполагая, что Lactobacillus sp. CFS ингибировал метаболизм G. vaginalis. Кроме того, экспрессия bcrA и mds, участвующих в устойчивости к противомикробным препаратам, была снижена в клетках биопленки, подвергшихся воздействию CFS всех трех лактобацилл.Интересно, что только ATCC14917 CFS подавлял экспрессию bcrA и mds в планктонных клетках. В нашем предыдущем исследовании Lactobacillus sp. прямо ингибировал экспрессию bcrA и mds [24]. Это явление может объяснить более высокую эффективность пробиотиков в сочетании с антибиотиками для лечения БВ по сравнению с монотерапией антибиотиками [5]. Кастро и др. [54] использовали технологию RNA-seq для выявления повышенной экспрессии pat, gtf, bcrA и mds в клетках биопленки по сравнению с планктонными клетками. В настоящем исследовании мы обнаружили, что Lactobacillus sp.уменьшил экспрессию генов, связанных с биопленкой, у G. vaginalis и ингибировал образование биопленки, что согласуется с предыдущим исследованием, показывающим, что лактобациллы инфильтрируют биопленки BV и приводят к гибели бактерий [53]. Примечательно, что CFS из DM8909 и ATCC14917 повышал экспрессию sld в 10 раз в планктонных клетках, а DM8909 также повышал экспрессию gtf и stp в суспендированных клетках G. vaginalis. Напротив, эти три гена подавлялись DM8909 CFS в клетках биопленки, причем это подавление также наблюдалось в sld и pat с помощью ATCC14917 CFS.Возможное объяснение состоит в том, что G. vaginalis по-разному реагирует на Lactobacillus sp. КФС во взвешенном и биопленочном состояниях. CFS L. delbrueckii DM8909 активировал гены sld, gtf и stp G. vaginalis в планктонной форме. Одно из возможных объяснений заключается в том, что свободные патогенные бактерии предпочитают проявлять патогенность, в то время как бактерии в биопленке с большей вероятностью выживают в присутствии CFS из L. delbrueckii DM8909. Это первое исследование, сообщающее об изменении экспрессии генов G. vaginalis, связанных с адгезией (pat), образованием биопленки (gtf), метаболизмом (stp, atm и itm) и устойчивостью к противомикробным препаратам (bcrA и mds) у Lactobacillus sp.Мы также оценили влияние Lactobacillus sp. по производству Ил-8. В предыдущих исследованиях сообщалось, что индуцированная E. coli продукция IL-8, провоспалительного цитокина, ингибируется Lactobacillus sp. в клетках HT-29 [33] и Lpb. plantarum ATG-K2, ATG-K6 и ATG-K8 лизаты снижают липополисахарид-индуцированную продукцию IL-6 и фактора некроза опухоли-α в мышиных макрофагах [55]. В настоящем исследовании Lactobacillus sp. ингибировал продукцию IL-8, индуцированную G. vaginalis и H 2 O 2 .Эти результаты согласуются с предыдущим исследованием, показывающим, что Lactobacillus sp. штаммы или Lpb. plantarum 59 и L. fermentum 137 CFS снижали секрецию IL-8 в клетках HeLa, индуцированную инфекцией G. vaginalis [23]. Кроме того, Ян и соавт. [56] сообщили, что Lpb. plantarum 200655, выделенный из кимчи, показал активность по удалению радикалов и активность по ингибированию перекисного окисления липидов. В настоящем исследовании три лактобациллы продемонстрировали модулирующее действие на уровни IL-8 в условиях окислительного стресса в клетках HeLa.Дальнейшие исследования противовоспалительной функции Lactobacillus sp. во влагалищной среде. В наших исследованиях все еще есть некоторые ограничения. Адгезионные и противовоспалительные анализы были выполнены в клетках HeLa, которые являются типом раковых клеток; поэтому оценка этих результатов с использованием нормальных вагинальных эпителиальных клеток может быть более достоверной. Хотя экспериментальные исследования на мышах подтвердили, что Lactobacillus sp. может лечить БВ, вызванный G. vaginalis [29, 57], необходимы дополнительные исследования на других животных моделях и людях, чтобы полностью изучить механизмы и безопасность пробиотиков для вагинального применения.

    В заключение мы продемонстрировали, что Lactobacillus sp. отображали четыре атрибута, связанных с анти-G. vaginalis: (1) ингибирование роста, (2) снижение адгезии за счет барьерной функции, (3) ингибирование образования антибиопленок и ослабление экспрессии фактора вирулентности и (4) противовоспалительные свойства. В частности, мы показали, что Lactobacillus sp. метаболиты влияли на экспрессию ключевых генов, связанных с факторами вирулентности, адгезией, образованием биопленок, метаболизмом и устойчивостью к противомикробным препаратам у G.вагинальный. Несколько штаммов Lactobacillus sp. могут использоваться вместе для установления вагинального эубиоза из-за специфичности пробиотических штаммов. Наши результаты идентифицировали Lpb. plantarum ZX27 в качестве возможного кандидата для дальнейших исследований из-за его удовлетворительного анти-G. вагинальная активность.

    Биоразнообразие Lactobacillus spp. из иранского сырого молока сыр Мотал и антибактериальная оценка на основе генов, кодирующих бактериоцин | AMB Express

  • Ahmed MM, Chowdhury A, Malaker R, Hossain MN, Fakruddin M, Noor R (2013) бактериоциновый профиль пробиотика Lactobacillus spp.выделены из йогурта. Int J Pharm Chem 3:50–56

    Google ученый

  • Алегрия А., Альварес-Мартин П., Сакристан Н., Фернандес Э., Дельгадо С., Майо Б. (2009) Разнообразие и эволюция микробных популяций во время производства и созревания Casín, традиционного испанского сыра без закваски, изготовленного из коровье молоко. Int J Food Microbiol 136:44–51

    Статья пабмед Google ученый

  • Alegría Á, Delgado S, Roces C, López B, Mayo B (2010) Бактериоцины, продуцируемые дикими штаммами Lactococcuslactis , выделенными из традиционных сыров без закваски, изготовленных из сырого молока.Int J Food Microbiol 143:61–66

    Статья пабмед Google ученый

  • Al-Otaibi M (2012) Выделение молочнокислых бактерий из некоторых традиционных саудовских продуктов. Am J Food Technol 7:690–699

    Статья Google ученый

  • Antonsson M, Molin G, Ardö Y (2003) Штаммы Lactobacillus , выделенные из сыра Danbo в качестве дополнительных культур в модельной системе сыра.Int J Food Microbiol 85:159–169

    CAS Статья пабмед Google ученый

  • Bautista-Gallego J, Alessandria V, Fontana M, Bisotti S, Taricco S, Dolci P, Cocolin L, Rantsiou K (2014) Разнообразие и функциональная характеристика Lactobacillus spp. выделяют на протяжении всего созревания твердого сыра. Int J Food Microbiol 181:60–66

    CAS Статья пабмед Google ученый

  • Беттаче Г., Фатма А., Милуд Х., Мебрук К. (2012) Выделение и идентификация молочнокислых бактерий из дхана, традиционного сливочного масла, и их основные технологические признаки.World Appl Sci J 17:480–488

    CAS Google ученый

  • Бунесова В., Киллер Дж., Влкова Е., Мусилова С., Томаска М., Рада В., Кмет В. (2014) Выделение и характеристика бифидобактерий из овечьего сыра. Int J Food Microbiol 188:26–30

    CAS Статья пабмед Google ученый

  • Castro M, Palavecino N, Herman C, Garro O, Campos C (2011) Молочнокислые бактерии, выделенные из кустарных сухих колбас: характеристика антибактериальных соединений и изучение факторов, влияющих на выработку бактериоцина.Мясные науки 87: 321–329

    CAS Статья пабмед Google ученый

  • Chaalel A, Riazi A, Dubois-Dauphin R, Thonart P (2015) Скрининг плантарицина EF и JK в алжирском изоляте Lactobacillus plantarum . Asian Pac J Trop Dis 5: 474–482

    CAS Статья Google ученый

  • Cintas L, Casaus M, Herranz C, Nes I, Hernández P (2001) Обзор: бактериоцины молочнокислых бактерий.Food Sci Technol Int 7: 281–305

    CAS Статья Google ученый

  • De Vuyst L, Leroy F (2007) Бактериоцины молочнокислых бактерий: производство, очистка и применение в пищевых продуктах. J Mol Microbiol Biotechnol 13:194–199

    Статья пабмед Google ученый

  • Эмеренини Э., Афолаби О., Околие П., Акинтокун А. (2013) Выделение и молекулярная характеристика молочнокислых бактерий, выделенных из свежих фруктов и овощей, с использованием гнездового ПЦР-анализа.Br Microbiol Res J 3:368

    CAS Статья Google ученый

  • Engelhardt T, Albano H, Kiskó G, Mohácsi-Farkas C, Teixeira P (2015) Антилистерическая активность бактериоциногенных Pediococcusacidilactici HA6111-2 и Lactobacillus plantarum, выращенных в условиях pH и осмотического стресса ESB. Food Microbiol 48:109–115

    CAS Статья пабмед Google ученый

  • Ghanbari M, Jami M, Kneifel W, Domig KJ (2013) Антимикробная активность и частичная характеристика бактериоцинов, продуцируемых лактобациллами , выделенными из осетровых рыб.Контроль пищевых продуктов 32:379–385

    CAS Статья Google ученый

  • Guetouache M, Guessas B (2015) Характеристика и идентификация молочнокислых бактерий, выделенных из традиционного сыра (клила), приготовленного из коровьего молока. Afr J Microbiol Res 9:71–77

    CAS Статья Google ученый

  • Habibi-Najafi MB, Lee BH (2007) Удаление горечи триптических гидролизатов из ß-казеина и сыра, модифицированного ферментами, с помощью X-Prolyl DipeptidylPeptidase из Lactobacillus casei ssp. корпус LG. Иран. J Sci Technol 31(3):263–270

    CAS Google ученый

  • Хаялоглу А., Гювен М., Фокс П. (2002) Микробиологические, биохимические и технологические свойства турецкого белого сыра «БеязПейнир». Int Dairy J 12: 635–648

    CAS Статья Google ученый

  • Йокович Н., Вукасинович М., Вельович К., Толинацки М., Тописировик Л. (2011) Характеристика незаквасочных молочнокислых бактерий в традиционном домашнем сыре Радан во время созревания.Arch Biol Sci 63(1):1–10

    Статья Google ученый

  • Kermanshahi RK, Peymanfar S (2012) Выделение и идентификация лактобацилл из сыра, йогурта и силоса с помощью гена рДНК 16S и изучение продукции бактериоцина и биосурфактанта. Jundishapur J Microbiol 5:528–532

    Статья Google ученый

  • Knoll C, Divol B, Du Toit M (2008) Генетический скрининг молочнокислых бактерий энологического происхождения на наличие генов, кодирующих бактериоцин.Food Microbiol 25:983–991

    CAS Статья пабмед Google ученый

  • Leroy F, De Vuyst L (2004) Молочнокислые бактерии как функциональные заквасочные культуры для пищевой ферментационной промышленности. Trends Food Sci Technol 15:67–78

    CAS Статья Google ученый

  • Lima ET, AndreattiFilho RL, Okamoto AS, Noujaim JC, Barros MR, Crocci AJ (2007) Оценка in vitro антагонистических веществ, продуцируемых Lactobacillus spp.выделены от кур. Can J Vet Res 71:103

    CAS пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Mahrous H, Mohamed A, El-Mongy MA, El-Batal A, Hamza H (2013) Изучение производства и оптимизации бактериоцина с использованием новых изолятов Lactobacillus spp. выделены из некоторых молочных продуктов в различных условиях культивирования. Food Nutr Sci 4(3):342

    Статья Google ученый

  • Mennane Z, Faid M, Lagzouli M, Ouhssine M, Elyachioui M, Berny E, Ennouali M, Khedid K (2007) Физико-химическая, микробная и органолептическая характеристика марокканской клилы.Ближний Восток J Sci Res 2: 93–97

    Google ученый

  • Mills S, Serrano LM, Griffin C, O’Connor PM, Schaad G, Bruining C, Hill C, Ross RP, Meijer WC (2011) Ингибирующая активность Lactobacillus plantarum LMG P-26358 против Listeriainnocua Listeriainnocua при использовании в качестве вспомогательной закваски при производстве сыра. Microb Cell Fact 10:1–11

    Статья Google ученый

  • Моллой Э.М., Хилл С., Коттер П.Д., Росс Р.П. (2011) Бактериоцины, Энциклопедия молочных наук.Академическая пресса, Кембридж, стр. 420–429

    Книга Google ученый

  • Моцци Ф., Рая Р.Р., Виньоло Г.М. (2015) Биотехнология молочнокислых бактерий: новые приложения, 2-е изд. Wiley-Blackwell, Сингапур

    Книга Google ученый

  • Naylor J, Sharpe ME (1958) 699. Lactobacilli в сыре Чеддер: 1. Использование селективных сред для выделения и серологического типирования для идентификации.J Dairy Res 25:92–103

    CAS Статья Google ученый

  • Николич М., Терзич-Видоевич А., Йовчич Б., Бегович Дж., Голич Н., Тописирович Л. (2008) Характеристика молочнокислых бактерий, выделенных из Букуляца, домашнего сыра из козьего молока. Int J Food Microbiol 122:162–170

    CAS Статья пабмед Google ученый

  • Noda M, Miyauchi R, Danshiitsoodol N, Higashikawa F, Kumagai T, Matoba Y, Sugiyama M (2015) Характеристика и мутационный анализ двухполипептидного бактериоцина, продуцируемого цитрусовыми Lactobacillus brevis 174A.Биол Фарм Булл 38:1902–1909

    CAS Статья пабмед Google ученый

  • Ortolani M, Moraes P, Perin L, Viçosa G, Carvalho K, Junior AS, Nero L (2010) Молекулярная идентификация встречающихся в природе бактериоциногенных и бактериоциногеноподобных молочнокислых бактерий в сыром молоке и мягком сыре. J Dairy Sci 93:2880–2886

    CAS Статья пабмед Google ученый

  • Палис Т., Накамура Л., Кохан Ф.М. (1997) Открытие и классификация экологического разнообразия в бактериальном мире: роль данных о последовательности ДНК.Int J Syst Evol Microbiol 47:1145–1156

    CAS Google ученый

  • Parada JL, Caron CR, Medeiros ABP, Soccol CR (2007) Бактериоцины молочнокислых бактерий: очистка, свойства и использование в качестве биоконсервантов. Braz Arch BiolTechnol 50:512–542

    Статья Google ученый

  • Pyar H, Peh K (2014) Характеристика и идентификация Lactobacillus acidophilus с использованием системы быстрой идентификации биологии.Int J Pharm Pharmsci 6(1):189–193

    Google ученый

  • Randazzo CL, Torriani S, Akkermans AD, de Vos WM, Vaughan EE (2002) Разнообразие, динамика и активность бактериальных сообществ во время производства кустарного сицилийского сыра, оцененные с помощью анализа 16S рРНК. Appl Environ Microbiol 68:1882–1892

    CAS Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Remiger A, Ehrmann MA, Vogel RF (1996) Идентификация генов, кодирующих бактериоцин, в лактобациллах с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).Syst Appl Microbiol 19:28–34

    CAS Статья Google ученый

  • Санкар Н.Р., Приянка В.Д., Редди П.С., Раджаникант П., Кумар В.К., Индира М. (2012)Очистка и характеристика бактериоцина, продуцируемого Lactobacillus plantarum , выделенного из коровьего молока. Int J Microbiol Res 3:133–137

    Google ученый

  • Senbagam D, Gurusamy R, Senthilkumar B (2013) Физико-химическая и биологическая характеристика нового бактериоцина, продуцируемого Bacillus cereus NS02.Asian Pac J Trop Med 6: 934–941

    CAS Статья пабмед Google ученый

  • Şengül M (2006) Микробиологическая характеристика гражданского сыра, традиционного турецкого сыра: микробиологическое качество, выделение и идентификация его местных Lactobacilli . World J MicrobiolBiotechnol 22:613–618

    Статья Google ученый

  • Сингх С., Сингх Р. (2014) Фенотипическая и генотипическая характеристика разнообразия незаквасочных видов Lactobacillus в индийском сыре Чеддер.LWT Food Sci Technol 55:415–420

    CAS Статья Google ученый

  • Stackebrandt E, Goebel B (1994) Таксономическое примечание: место для реассоциации ДНК-ДНК и анализа последовательности 16S рРНК в существующем определении вида в бактериологии. Int J Syst Evol Microbiol 44:846–849

    CAS Статья Google ученый

  • Тодоров С.Д. (2009) Бактериоцины из Lactobacillus plantarum , генетическая организация и механизм действия.Braz J Microbiol 40:209–221

    CAS Статья пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Тургай О., Эрбилир Ф (2006) Выделение и характеристика Lactobacillus bulgaricus и Lactobacillus casei из различных пищевых продуктов. Турк Дж. Биол 30: 39–44

    Google ученый

  • Tzanetakis N, Litopoulou-Tzanetaki E (1992) Изменения количества и видов молочнокислых бактерий в Фета и Телеме, двух греческих сырах из овечьего молока.J Dairy Sci 75:1389–1393

    Статья Google ученый

  • Veljovic K, Terzic-Vidojevic A, Vukasinovic M, Strahinic I, Begovic J, Lozo J, Ostojic M, Topisirovic L (2007) Предварительная характеристика молочнокислых бактерий, выделенных из сыра Златар. J Appl Microbiol 103:2142–2152

    CAS Статья пабмед Google ученый

  • Верма А.К., Банерджи Р., Двиведи Х.П., Джунея В.К. (2014) Бактериоцины: потенциал сохранения пищевых продуктов.В: Batt CA, Tortorello ML (eds) Энциклопедия пищевой микробиологии, том 1. Elsevier Ltd, Academic Press, Кембридж, Массачусетс, США, стр. 180–186

    Google ученый

  • Wada T, Noda M, Kashiwabara F, Jeon HJ, Shirakawa A, Yabu H, Matoba Y, Kumagai T, Sugiyama M (2009) Характеристика четырех плазмид, содержащихся в штамме Lactobacillus brevis , кодирующем новый бактериоцин, бревицин 925A и конструирование челночного вектора для молочнокислых бактерий и Escherichia coli .Микробиология 155:1726–1737

    CAS Статья пабмед Google ученый

  • Xie Y, An H, Hao Y, Qin Q, Huang Y, Luo Y, Zhang L (2011) Характеристика антилистериозного бактериоцина, продуцируемого Lactobacillus plantarum LB-B1, выделенного из кумыса, традиционно ферментируемого молочный продукт из Китая. Контроль пищевых продуктов 22:1027–1031

    CAS Статья Google ученый

  • Ятим А., Балба М., Аль-Суррайаи Т. (2008) Выделение молочнокислых бактерий с пробиотическим потенциалом из верблюжьего молока.Int J Dairy Sci 3:194–199

    CAS Статья Google ученый

  • Zacharof M, Lovitt R (2012) Бактериоцины, продуцируемые молочнокислыми бактериями, обзорная статья. APCBEE Proc 2:50–56

    CAS Статья Google ученый

  • Здолец Н., Филипович И. (2012) Идентификация молочнокислых бактерий, выделенных из сухих ферментированных колбас. Вет Арх 82: 265–272

    Google ученый

  • Характеристика бактериоцинов, продуцируемых Lactobacillus spp.Выделение из традиционного пакистанского йогурта и их антимикробная активность в отношении распространенных патогенов пищевого происхождения

    Молочнокислые бактерии (МКБ) на протяжении веков широко известны своей пробиотической активностью. Эти бактерии синтезируют некоторые секреторные белковые токсины, бактериоцины, которые способствуют уничтожению сходных или взаимосвязанных штаммов бактерий. Это исследование было направлено на характеристику бактериоцинов, экстрагированных из Lactobacillus spp. обнаружены в йогурте и оценивают их бактерицидное действие на пищевые бактерии.Двенадцать выделенных Lactobacillus spp. были исследованы на получение бактериоцинов методом экстракции органическим растворителем. Бактериоцины, продуцируемые двумя из этих штаммов, Lactobacillus helveticus (BLh) и Lactobacillus plantarum (BLp), показали наиболее значительную антимикробную активность, особенно в отношении Staphylococcus aureus и Acinetobacter baumannii . Анализ SDS-PAGE показал, что L . плантарум и L .Бактериоцины helveticus имеют молекулярную массу ~10 кДа и ~15 кДа соответственно. л . Бактериоцин plantarum (BLp) был термостабильным, в то время как L . Бактериоцин helveticus (BLh) оказался термолабильным. Оба бактериоцина проявляют активность при кислом рН. Воздействие УФ-света усиливает активность BLh; однако это оказало незначительное влияние на BLp. Различные протеолитические ферменты подтвердили белковую природу обоих бактериоцинов.Из этого исследования был сделан вывод, что экстракты бактериоцина из L . helveticus (BLh) можно считать предпочтительным кандидатом против патогенов пищевого происхождения по сравнению с L . подошвенный (BLp). Эти частично очищенные бактериоцины должны быть подвергнуты дальнейшей обработке для получения очищенного продукта, который можно было бы использовать для предотвращения порчи пищевых продуктов и в целях сохранения.

    1. Введение

    Болезни пищевого происхождения (FBDs) вызывают глобальную озабоченность. Несмотря на использование современных методов консервирования пищевых продуктов, уровень связанных с пищевыми продуктами заболеваний по-прежнему увеличивается и является существенной причиной смерти, особенно в странах, где отсутствуют надлежащие системы мониторинга безопасности пищевых продуктов.Около одной трети населения мира ежегодно страдает от болезней, связанных с пищевыми продуктами, из-за употребления зараженных или отравленных пищевых продуктов, таких как консервы, мясо, птица и кисломолочные продукты [1].

    Воздействие на потребителей питательной и сбалансированной диеты стимулировало научные исследования в пищевой промышленности по исследованию и внедрению натуральных соединений в процесс обработки и консервирования пищевых продуктов с целью сокращения использования химических веществ для подавления микробного роста и увеличения срока годности пищевых продуктов.Тщательная и всесторонняя работа по борьбе с заболеваниями, связанными с пищевыми продуктами, представляет собой очень сложную задачу, требующую знаний в области науки и техники для обеспечения безопасности, контроля и управления пищевыми продуктами [2].

    Йогурт является одним из широко используемых молочных продуктов, который традиционно производится и используется на протяжении веков по всему миру (местное название Dahi в Пакистане). Синтезируется путем ферментации молока с помощью бактерий. Согласно общему убеждению на протяжении веков, дахи используется для лечения диареи во многих странах, включая Пакистан.Многие исследования показали, что йогурт содержит полезную диверсифицирующую микрофлору, такую ​​как молочнокислые бактерии (МКБ) [3].

    Молочнокислые бактерии (МКБ) относятся к общепризнанным безопасным (GRAS) микроорганизмам и широко используются в качестве пищевых и кормовых ферментаторов и консервантов, добавляемых в строго контролируемых условиях. Молочнокислые бактерии, также известные как Lactobacillales, представляют собой грамположительные анаэробы, которые представляют собой неспорообразующие палочки или кокки и показывают отрицательный тест на каталазу. Во время ферментации углеводов они производят молочную кислоту в качестве основного конечного продукта и выдерживают чрезвычайно низкие уровни pH. Lactobacillus — самый крупный род, используемый в производстве множества не только молочных продуктов, таких как молоко, йогурт и сыр, но также солений, пива, вина, сидра, шоколада и других ферментированных продуктов. Эти бактерии также используются для производства кормов для животных, например силоса [4].

    Многие штаммы молочнокислых бактерий, выделенные из йогурта, которые участвуют в ферментации молока, также содержат множество других антимикробных соединений, таких как перекись водорода, диацетил, жирные кислоты, реутерин (3-гидроксипропионовый альдегид), этанол и бактериоцины.Эти бактерии приносят пользу для здоровья, проявляя антагонистическую активность против многих патогенов. Йогурт считается источником бактерий Lactobacillus , которые борются с патогенами, вызывающими определенные расстройства пищеварения и кишечные инфекции. Йогурт считается здоровой пробиотической диетой. Различные штаммы бактерий Lactobacillus были выделены из йогурта в мире в поисках нового штамма с наивысшей эффективностью [3, 4].

    Бактериоцины привлекли внимание многих исследователей и широко изучались.Эти небольшие белки или пептиды (обычно содержащие менее 60 аминокислот) убивают или ингибируют рост некоторых бактериальных штаммов сходных или близкородственных видов и обычно обладают узким спектром ингибирования роста бактерий [5, 6]. На основании их аминокислотных последовательностей, молекулярной массы, посттрансляционных модификаций и генетических характеристик грамположительные бактериоцины были разделены на четыре класса. Бактериоцины класса I (также известные как лантибиотики) в значительной степени посттрансляционно модифицированы и термостабильны.Обычно они содержат менее 28 аминокислот (<5 кДа) и представляют собой линейные или глобулярные пептиды, содержащие модифицированные аминокислоты лантионин и β -метиллантионин и дегидратированные аминокислоты [7, 8]. Бактериоцины класса II не модифицированы и обычно содержат 30-60 аминокислот (<10 кДа). Они обладают уникальными свойствами термостабильности, отсутствия нелантионина и положительно заряжены. Эта категория далее была разделена на пять подклассов [9]. Бактериоцины класса III (также известные как бактериолиз) имеют большие размеры (> 30  кДа) и термолабильны.При воздействии высокой температуры (100°С) эти бактериоцины обычно инактивируются в течение 30 минут. Род Lactobacillus продуцирует бактериоцины класса III, такие как гельветицины J и V и лактацин B. Сложные бактериоцины или бактериоцины класса IV содержат белок с липидными и углеводными молекулами, которые способствуют антимикробной активности [10].

    Бактериоцин-продуцирующие штаммы могут использоваться в качестве пробиотиков. Бактериоцин может быть использован в качестве пищевых добавок, при лечении патоген-ассоциированных заболеваний и терапии рака [11, 12].Действительно, некоторые инфекционные заболевания, вызываемые патогенными штаммами грамположительных бактерий (стафилококки, микрококки и стрептококки), можно предотвратить с помощью бактериоцинов [13]. Кроме того, многие грамотрицательные бактерии, такие как E . coli , Salmonella , Shigella , Listeria и Vibrio также использовались в качестве тест-организма для исследования антагонистической активности вновь выделенных противомикробных пептидов. Хотя бактериоцин был выделен из многих штаммов Lactobacillus plantarum , Lactobacillus bulgaricus , Lactobacillus acidophilus и Lactobacillus lactis , он показал значительную активность против патогена.Тем не менее, ученые изучают новые штаммы из различных пищевых продуктов, чтобы решить проблему наиболее распространенных пищевых инфекций [12].

    Повышенный потребительский спрос на натуральные консерванты также заставил ученых сосредоточиться на поиске новых природных ингибиторов. Бактериоцин-продуцирующие МКБ использовались во многих заквасочных культурах для предотвращения колонизации патогенными микробами многих пищевых продуктов. Эти многообещающие характеристики бактериоцина и бактериоцин-продуцирующих молочнокислых бактерий сделали их важными не только для сохранения пищевых продуктов, но и для лечения некоторых устойчивых к лекарствам патогенов [13, 14].

    Цель настоящего исследования заключалась в частичной очистке бактериоцинов, синтезируемых Lactobacillus spp. обнаружены в образцах йогурта местного производства. Эти частично очищенные бактериоцины были дополнительно сопоставлены по их физическим и биохимическим свойствам, и их антагонистическая активность была протестирована против бактериальных патогенов пищевого происхождения. Двумя изолятами, выбранными для оценки продукции и активности бактериоцина, были L . helveticus и L . подошвенный .

    1.1. Вклады

    Наш вклад в это исследование заключается в следующем: (i) В отличие от вышеупомянутых исследований, мы провели частичную очистку, характеристику и антибактериальную активность бактериоцина, выделенного из видов Lactobacillus , обнаруженных в традиционном йогурте. Дальнейшая оценка видов Lactobacillus , выделенных из образцов йогурта, показала, что L . helveticus и L .В продукции бактериоцинов участвовало штаммов plantarum . Сравнительный анализ обоих бактериоцинов показал, что бактериоцин BLh является наиболее подходящим средством биологической борьбы с патогенами пищевого происхождения. (ii) Среди этих двух штаммов бактериоцин, экстрагированный из L . helveticus редко встречается где-либо в мире. Впервые этот штамм был выделен из образца йогурта, в то время как L . plantarum много раз выделяли из молочных продуктов.Бактериоцин из этих изолятов можно дополнительно подвергнуть некоторым подходам in vivo, чтобы найти реальную мишень экстрагированного бактериоцина.

    2. Методология
    2.1. Бактериальные штаммы, среда и условия культивирования

    Десять клинически идентифицированных штаммов (индикаторный организм), использованных в этом исследовании, были заказаны в бактериологической лаборатории кафедры микробиологии факультета естественных наук Пенджабского университета, Пакистан. Штаммы индикатора, включенные в это исследование: Enterococcus Faecium DO, Bacillus Subtilis , STREPTOCOCCUS Pyogenes , Staphylococcus aureus , метициллин-устойчивый к метициллину (MRSA), escherichia Coli , Klebsiella pneumoniae , Pseudomonas aeruginosa , Acinetobacter baumannii и Salmonella paratyphi A.

    2.2. Выделение, скрининг и идентификация бактериоцин-синтезирующих штаммов

    Всего за три месяца (с января 2019 г. по апрель 2019 г.) в местных магазинах в нескольких городских районах провинции Хайбер-Пахтунхва в Пакистане было закуплено 50 образцов «йогурта». . Эти традиционные йогурты были приготовлены из ранее приготовленных домашних йогуртов, а затем асептически гомогенизированы. Десять граммов каждого образца йогурта смешивали с 50 мл 0,9% стерильного физиологического раствора и взбалтывали.Затем эту смесь последовательно разбавляли в восемь раз. Разбавленные образцы высевали (0,1 мл суспензии) на агар Де Мана, Рогозы и Шарпа (MRS) (Merck, Дармштадт, Германия) методом посева. Чашки с агаром MRS инкубировали в анаэробных условиях при 37°C в течение максимум 48 часов с использованием системы BBL GasPak. На каждой чашке появлялось около двенадцати различных колоний, которые затем пересевали на среду MRS для дальнейшего скрининга бактериоцин-продуцирующих изолятов.

    Все изоляты идентифицировали методом, описанным Schillinger и Lücke [15].Тест-полоски API 50 CHL (bioMérieux, Marcy l’Etoile, Франция) использовались в тестах на ферментацию сахара.

    2.3. Определение антагонистической активности

    Бактериоцин-продуцирующие изоляты (тест-организмы) подвергали скринингу методом диффузии в лунки агара [16]. Инокулят тестируемых организмов добавляли в бульон MRS (50 мл), который затем подвергали 24-часовой инкубации при 37°C в инкубаторе с встряхиванием. После инкубации бульон, содержащий тестируемые микроорганизмы, центрифугировали при 2500 g в течение 5 минут.После инкубации газон с индикаторным организмом (бактерии MRSA) выращивали на чашке с агаром MRS методом рассева на чашках. В агаре с помощью стерильной пастеровской пипетки делали прозрачные лунки диаметром 6 мм. Аликвоту супернатанта (~ 60  мк л) загружали в каждую лунку и соответственно маркировали. Затем планшеты инкубировали при 37°С в течение 18-24 часов. Планшеты исследовали на наличие светлых зон вокруг лунок, что указывает на бактериоциновую активность тест-организмов.Размер зоны ингибирования измеряли в миллиметрах и надлежащим образом регистрировали.

    2.4. Экстракция бактериоцинов

    Метод экстракции растворителем Westley et al. [17] использовали для выделения бактериоцинов из выбранных штаммов. Для получения бесклеточного экстракта выделенные бактерии инокулировали в бульон MRS (100 мл) и инкубировали при 37°C в течение 24 часов. В делительную воронку объемом 500 мл добавляли культуральный бульон (~50 мл) и равный объем этилацетата.Делительную воронку энергично встряхивали в течение 10 минут, а затем давали содержимому осесть, образуя два отдельных слоя. Верхний органический слой, содержащий бактериоцин, осторожно отделяли. Ту же процедуру повторяли с остальной культурой бульона и отделяли верхний слой растворителя. Затем растворитель удаляли в вакууме с помощью роторного испарителя. Конечный высушенный экстракт растворяли в 1 мл метанола, pH супернатанта доводили до 6 с помощью 1M NaOH для устранения ингибирующей активности кислоты, а затем обрабатывали 5 мг/мл каталазы для удаления антагонистической активности перекиси водорода.Экстракт пропускали через мембранный фильтр 0,20  мкм с размером пор мкм (Sartorius Stedim). Отфильтрованный супернатант хранили в стеклянных флаконах.

    2.5. Активность экстрагированных бактериоцинов в отношении штаммов-индикаторов

    Антибактериальную активность экстрагированных бактериоцинов определяли с помощью диффузионного анализа в лунках агара – активность в отношении десяти штаммов-индикаторов. Антибактериальную активность измеряли по зоне ингибирования.

    2.6. Физические и биохимические характеристики бактериоцинов

    Факторы, влияющие на антимикробную активность бактериоцинов, частично выделенных из L . helveticus (BLh) и L . plantarum (BLp) были следующими.

    2.6.1. Температура

    Все образцы экстрактов бактериоцинов подвергались воздействию различных температур в течение 15 минут. Затем их активность тестировали с использованием метода диффузии в лунки агара в отношении всех индикаторных организмов и сравнивали активность с неэкспонированными бактериоцинами в качестве контроля.

    2.6.2. pH

    Чтобы проверить, как pH влияет на активность бактериоцина, аликвоту экстракта бактериоцина (0.5 мл) добавляли в бульон MRS (4,5 мл) при различных значениях pH (от 3 до 11) и инкубировали в течение 30 минут при 37°C. Образцы бактериоцинов подвергали воздействию различных значений pH и анализировали на наличие индикаторных организмов методом диффузии в лунки агара, а активность сравнивали с не подвергавшимися воздействию бактериоцинами в качестве контроля.

    2.6.3. Соли желчных кислот

    Соли желчных кислот, влияющие на активность бактериоцинов, тестировали путем добавления аликвоты экстракта бактериоцина (0,5 мл) в бульон MRS (4,5 мл) при различных концентрациях солей желчных кислот (0,5 мл).от 1 до 0,6%) и инкубируют 30 минут при 37°С. Образцы бактериоцинов, подвергшиеся воздействию различных концентраций солей желчных кислот, анализировали в отношении индикаторных организмов методом диффузии в лунки агара, а активность сравнивали с активностью не подвергавшихся воздействию бактериоцинов в качестве контроля.

    2.6.4. УФ-свет

    Экстракты бактериоцина (10  мл) подвергали воздействию УФ-света с различной длиной волны в течение 15, 30, 45, 60 и 75 минут. Образцы бактериоцинов, подвергнутые воздействию различных условий УФ-излучения, анализировали на наличие индикаторных организмов методом диффузии в лунки агара, а активность сравнивали с активностью не подвергавшихся воздействию бактериоцинов в качестве контроля.

    2.6.5. Ферменты

    Экстрагированный бактериоцин тестировали с различными ферментами (1 мг/мл) и инкубировали 2 ч при 37°С: протеиназа К, химотрипсин, трипсин, пепсин, проназа, папаин и α -амилаза (Sigma, США ). Контроль без фермента также инкубировали. Для измерения антимикробной активности применяли метод диффузии в лунки агара.

    2.6.6. Оценка размера экстрагированных бактериоцинов

    Молекулярную массу бактериоцинов оценивали с помощью электрофореза в 15% полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) с использованием электрофореза LKB Bromma 2050 Midget (Pharmacia Amersham Co.). После электрофореза гели окрашивали кумасси бриллиантовым синим R-250. Белковая лестница (170-10 кДа) использовалась для оценки молекулярной массы бактериоцинов.

    2.7. Статистический анализ

    Для анализа данных применялись статистические инструменты, такие как корреляция Пирсона и ANOVA. Для анализа данных использовались программа R версии 1.3.959, GraphPad Prism версии 7.04 и MS Excel 2016.

    3. Результаты и обсуждение
    3.1. Выделение, скрининг и идентификация
    Lactobacillus spp.из йогурта

    Около 50 образцов йогурта были собраны в разных районах КПК, Пакистан, из которых были выделены двенадцать штаммов Lactobacillus и проверены на противомикробную активность в отношении индикаторных организмов. Среди этих 12 штаммов L . helveticus и L . plantarum показал самую высокую антибактериальную активность в отношении MRSA. Оба штамма видов Lactobacillus ( L , helveticus и L . plantarum ) были идентифицированы первым банком культуры Пакистана. При морфологической характеристике L . helveticus образовывал белые колонии, а L . plantarum образовывал желтые колонии на чашках с агаром MRS. Окрашивание по Граму подтвердило, что Lactobacillus spp. представляли собой грамположительные палочки, неподвижные и некапсулированные, с закругленными концами, не образующие спор. л . helveticus показал отрицательный тест на пигментацию, в то время как L . plantarum дал положительный результат на тест. Биохимические особенности L . helveticus и L . Изоляты plantarum включали положительные результаты теста на утилизацию цитрата и отрицательные результаты тестов на индол, метиловый красный, сероводород и оксидазу, как показано в таблице S1. Тест на каталазу был отрицательным для L . helveticus и положительный на L . подошвенный . Тест на солеустойчивость выявил L . helveticus как устойчивый к NaCl, а L . plantarum не показал устойчивости.

    3.2. Скрининг на антагонистическую активность в отношении индикаторного микроорганизма

    Производство бактериоцина происходило, когда Lactobacillus spp. находились в логарифмической фазе роста. Из двенадцати супернатантов только два изолята проявляли антагонистическую активность в отношении индикатора. Метод диффузии в лунки агара показал, что L . helveticus (BLh) показал наиболее значительную активность против MRSA через 18-24 часа инкубации при 37°C.Для сравнения, L . plantarum (BLp) показал аналогичную активность против MRSA после 24–48 часов инкубации при 37 °C в анаэробных условиях, как показано на рисунке S1.

    3.3. Антимикробная активность экстрактов бактериоцинов

    Частичная очистка бактериоцинов из Lactobacillus sp. изолятов было получено с использованием метода экстракции органическим растворителем. Здесь верхний этилацетатный слой содержит бактериоцины, а нижний водный слой содержит отходы.Очистка бактериоцина не была достижима с помощью метода с сульфатом аммония, так как в ходе этого метода не было получено осадка. Антимикробная активность экстрактов бактериоцина из L . helveticus (BLh) и L . plantarum (BLp) тестировали против грамположительных и грамотрицательных индикаторных организмов с использованием метода диффузии в лунки агара, и оба они показали наиболее значительную активность против S . aureus ( и   мм соответственно) (рисунок 1 и таблица S2).Была более низкая активность против S . pyogenes ( и   мм), как показано в таблице S3. Аналогичная картина для ингибирующей зоны бактериоцинов против бактерий порчи пищевых продуктов была описана Abo-Amer [18]. Вот, L . plantarum выделял бактериоцин между поздней логарифмической и стационарной фазами роста с сопутствующей противомикробной активностью. В соответствии с нашим исследованием, Abo-Amer [18] выделил L . plantarum AA135 из египетского домашнего йогурта, который показал наиболее значительную активность против грамположительных патогенов пищевого происхождения ( S . эпидермис , S . aureus и Bacillus cereus ) и более слабой активностью в отношении Listeria monocytogenes и Bacillus subtilis . Частично очищенный бактериоцин, выделенный из L . plantarum и Lactobacillus helveticus показали сильную активность против грамотрицательных бактерий, таких как E . кишечная палочка , А . Бауманний , P . aeruginosa и S . paratyphi A. Трижды исследовали зону ингибирования для измерения стандартного отклонения.


    3.4. Влияние условий окружающей среды на активность
    Lactobacillus sp. Экстракты бактериоцинов

    Влияние температуры, рН, желчных солей и УФ-излучения на стабильность и активность бактериоцинов, экстрагированных из L . helveticus (BLh) и L . plantarum (BLp).Эти условия повлияли на антагонистическую активность бактериоцинов в отношении грамположительных и грамотрицательных индикаторных организмов, которые все являются патогенами пищевого происхождения. Некоторые из условий усиливали активность бактериоцинов, в то время как другие условия снижали их противомикробную активность.

    3.4.1. Температура

    Температура играет решающую роль в активности бактериоцинов, что показано на графике зависимости зоны ингибирования индикаторных организмов от температуры (табл. 1–4).Наблюдалась общая тенденция, показывающая снижение активности бактериоцина при повышении температуры с четкой разницей между двумя видами Lactobacillus . Бактериоцин, извлеченный из L . plantarum (BLp) был достаточно активен даже при воздействии высокой температуры и давления во время стерилизации, что указывает на то, что он является термостабильным белком. Abo-Amer, Fatima и Mebrouk сообщили об аналогичных наблюдениях в различных исследованиях [18, 19], подчеркнув полезность L . plantarum бактериоцин в процедурах консервирования пищевых продуктов из-за его устойчивости к высоким температурам. Бактериоцин, синтезированный L . helveticus (BLh) был более термолабилен, выдерживая температуру всего до 50°C в течение 15 минут. Воздействие температуры 60°C или выше в течение 15 минут приводило к потере активности. Бактериоцины производятся как L . helveticus и L . plantarum показал наиболее значительную активность после воздействия 30°C в течение 15 минут с широким диапазоном активности по отношению к S . aureus , MRSA, E . кишечная палочка , S . паратифов и А . baumannii , как показано на рисунках S2 и S3.

    12,6 91 253

    штаммы грамположительных бактерий Двуххвостый)) квадратный ()
    30 ° C 40 ° C 50 ° C 50 ° C 70 ° C 80 ° C 90 ° C 100 °C 121°C

    BLh бактериоцин E . faecium 16,8 14,7 0,9 0,5 0,3 0,2 0,1 0,0 0,006 (значительное) 0,68
    Б. SUBTILIS 181 13.76 12.0 0.7 0,4 ​​ 0,2 0,1 0,0 0,0 0,006 (значимый) 0.67
    S . Пирролидонилпептидаза 16,4 12,80 10,8 0,6 0,3 0,1 0,0 0,0 0,0 0,006 (значительное) 0,67
    MRSA 20,5 18.83 16.5 0.4 0.2 0.2 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0,007 (значимый) 0.65
    S . стафилококк 20,2 17,8 16,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,008 (значительное) 0,65

    50°C палочки 11,2 . Баумана паратифа 19,6 E . палочка +

    Штаммы грамотрицательных бактерий Зона ингибирования (мм) vs.вариации температуры (°C) Корреляция Пирсона ч/б вариации температуры и активности (значение = 0,05 (двусторонний)) квадрат ()
    30°C 40°C 60 ° C 70 ° C 80 ° C 100 ° C 100 ° C 121 ° C 121 ° C 121 ° C

    BLH Blh Blh Blh K . pneumoniae 10,8 10.3 8.9 0.3 0.2 0.2 0.0 0.0 0.0 0.0 0.009 (значимый) 0.64 0.64
    p . 12,1 10,7 0,4 0,1 0,0 0,0 0,0 0,0 0,007 (значительное) 0,65
    +
    12.7 12.3 11.6 0.8 0.5 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0,006 (значимый) 0.67
    S . 20,0 18,0 0,6 0,4 0,2 0,1 0,0 0,0 0,008 (значительное) 0,65
    +
    30,2 28,8 27,4 0,9 0,3 0,1 0,0 0,0 0,0 0,008 (значительное) 0,65

    Штаммы грамположительных бактерий05 (двуххвостые)) в квадрате () 30 ° C 40 ° C 50 ° C 60 ° C 70 ° C 80 ° C 90 ° C 100°C 121°C
    BLp бактериоцин E . Faecium 16.3 14.2 14.2 13.0 11.2 10.5 10.5 8.5 6.5 4,7 2.6 (значительный) 0,9914 S . Пирролидонилпептидаза 17,4 13,6 11,6 10,5 7,5 5,7 4,2 3,7 1,7 (значительное) 0,9487 B. subtilis 16,3 12,5 10,8 8,7 6,5 4,5 3,53 2,6 1,4 (значительное) 0,9326 + MRSA 20,6 18,8 16,4 16,7 14,5 12,7 10,4 8,4 4,3 ( значительный) 0,9843 S . aureus 19,7 17,7 15,4 15,7 13,5 11,6 9,25 7,4 3,3 (значительное) 0,9841 +
    +
    + +258 58 пневмонии 10,3 Р . палочки 11,2 27,4 24,9 baumannii 0,94

    грам-отрицательные бактериальные штаммы зоны ингибирования (мм ) в зависимости от колебаний температуры (°C) Корреляция Пирсона ч/б вариаций температуры и активности (значение = 0,05 (двусторонний)) в квадрате ()
    30°C 40°C 50 ° C 60 ° C 70 ° C 80 ° C 80 ° C 90 ° C 100 ° C 121 ° C 121 ° C 121 ° C
    BLP Бактериоцин K . 10,8 8,9 7,7 7,03 5,8 5,4 2,3 0,0 (значительное) 0,98
    +
    12,1 10,7 9,0 7,8 6,6 5,8 3,8 0,0 (значительное) 0,97
    Е. палочка 30,2 28,8 26,0 23,7 22,8 10,9 0,0 (значительное) 0,77
    . 12,7 12,3 11,6 10,56 9,0 8,0 7,1 5,66 0,0 (значительное)
    . ˙s паратифа 20,0 19,6 18,06 16,63 15,7 15,3 14,2 8,8 0,0 (значительное) 0,84

    3.4.2. pH

    Бактериоцины, продуцируемые изолированными Lactobacillus spp. были активны в широком диапазоне рН, с максимальной активностью, зарегистрированной при рН 5 (таблицы 5–8). Оба сохраняли противомикробную активность после воздействия кислых условий при pH 3–6 и pH 7.После воздействия щелочных условий при pH 8-11 L . Бактериоцин plantarum (BLp) показал резкое снижение при щелочном рН, в то время как L . Бактериоцин helveticus (BLh) не проявлял никакой активности при значениях рН выше 8. Аналогичные наблюдения были сделаны Sankar et al. [20], где бактериоцины сохраняли лишь частичную антагонистическую активность при изменении рН от кислого до щелочного. Fatima и Mebrouk [19] также наблюдали, что бактериоцин, синтезируемый L . plantarum проявлял максимальную активность при кислом рН, и Joerger и Klaenhammer [21] сообщили, что бактериоцин продуцируется L . helveticus проявлял максимальную активность при кислом рН. Бактериоцины, продуцируемые как Lactobacillus spp. показал наиболее значительную активность в отношении MRSA, S . золотистый , S . паратифов и Е . coli , чем по сравнению с остальными протестированными организмами, как показано на рисунках S4 и S5.Более слабая антагонистическая активность наблюдалась у К . pneumoniae и P . aeruginosa (таблицы 5 и 7).

    faecium 0,6589 + Пирролидонилпептидаза 10,0 0,7451 +

    грамможистые бактериальные штаммы зона ингибирования (мм) против вариаций pH корреляции Pearson B / W / W вариации и активность PH (значение = 0,05 (2 хвоста) ) в квадрате ()
    3 4 5 6 7 8 9 10 11

    BLH бактериоцин Е . 10,83 15,80 4,0 3,5 0,9 0,08 0,24 0,04 0,30 (значительное)
    Б. SUBTILIS 10.0 15.13 10 5,0 1.2 0.07 0,04 0,04 0,04 0,10 (значимый) 0.7621
    S . 9,06 13,83 12,0 1,5 0,32 0,06 0,02 0,03 (значительное)
    . ˙s Aureus 8.23 ​​ 12.90 25.0 15.0 15.0 0.22 0.22 0.29 0.02 0.03 (значительное) 0,4809
    MRSA 6,56 11,96 30,0 20,0 3,56 0,28 0,58 0,42 0,42 (не имеет значения) 0,3535

    58 90 палочки 0,7321 паратифа 0,462

    грамм отрицательные бактериальные поезда Зона ингибирования (мм) противВариации pH корреляция Pearson () B / W варианты рН и активность (значение = 0,05 (двуххвостый)) в квадрате ()
    3 4 5 6 7 8 9 10 11

    BLh бактериоцин K pneumoniae 10,66 16,00 8,0 5,0 0.9 0,08 0,24 0,04 0,30 (значимый) 0,7413
    9,33 15,00 13,0 9,0 1,2 0,07 0,04 0..040 0,01 (значительное)
    . Бауманний 8,66 13.83 17.0 15.0 1,5 0.02 0,06 0,02 0,02 0,03 (значимый) 0,6123
    S . 7,33 12,50 22,0 18,0 2,0 0,22 0,29 0,02 0,03 (значительное)
    E. кишечная палочка 5.53 11,6 30,6 25,0 3,56 0,28 0,58 0,42 0,42 (не имеет значения) 0,3236

    0,4062 + зиЫШз 10,0 0,8281 стафилококк 0,4984

    Штаммы грамположительных бактерий Зона ингибирования (мм) в зависимости от колебаний pH Корреляция Пирсона () ч/б колебания pH и активность (значение = 0.05 (двусторонняя)) в квадрате ()
    3 5 6 7 8 9 10 11

    BLP бактериоцин МРСА 10.70 11,00 25,0 20,0 18,0 4,0 3,5 2,5 2,0 (не имеет значения)
    Б. 10,40 10,33 10,0 9,0 4,06 4,40 3,56 4,00 (значительное)
    . ˙s Pyogenes 10.36 10.13 16.0 14.0 11.0 2,81259 2.50 2.0 0.90 (не значительный) 0.6414
    S . 10,96 11,73 22,0 17,0 16,0 3,5 3,2 3,1 1,5 (значительное)
    E. Faecium 12.00 11.26 8.0 8.0 7,0 1,5 1.3 1.2 1.2 00 (значимый) 0.9296

    пневмонии 0,7413 91 253 baumannii 0,6023 91 253
    грамотрицательные бактериальные штаммы зона ингибирования (мм) против вариаций pH (° C) корреляция Пирсона ( ) B / W варианты и активность PH (значение = 0,05 (двусторонняя) в квадрате ()
    3 4 5 6 7 8 9 10 10 11

    Бактериоцин BLp K . 10,66 16,00 8,0 5,00 0,9 0,08 0,24 0,04 0,30 (значительное)
    P. aeruginosa 9.33 15.00 13.00 0,07 0,04 0,04 0,04 0,01 (Знамена) 0.7321
    А . 8,66 13,83 17,0 15,0 1,5 0,32 0,06 0,02 0,03 (значительное)
    . ˙s Paratyphi 7.33 12.50 22.0 18.0 2,0 ​​ 0.22 0.22 0.29 0.02 0.03 (незначительно) 0,4620
    E . палочка 5,53 11,60 30,6 25,0 3,56 0,28 0,58 0,42 0,42 (не имеет значения) 0,3236

    3.4.3. Соли желчных кислот

    Толерантность к солям желчных кислот оценивали путем воздействия на экстракты бактериоцина различных концентраций солей желчных кислот (0.от 1 до 0,6%) (табл. 9–12). л . Бактериоцин plantarum (BLp) имел устойчивость к солям желчи 0,4%, в то время как L . Бактериоцин helveticus (BLh) не проявлял устойчивости к 0,4% солей желчных кислот. л . Бактериоцин helveticus проявлял высокую активность в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий в присутствии 0,1 и 0,2% солей желчных кислот, тогда как бактериоцин синтезировался L . plantarum оказался значительно активным против индикаторных штаммов в присутствии 0.1 и 0,3% солей желчных кислот, как показано на рисунках S6 и S7. В предыдущих исследованиях сообщалось, что Lactobacillus spp. показали толерантность к 0,3% солям желчных кислот, особенно тем, которые выделяют термостабильные бактериоцины [22]. В соответствии с этим термолабильный L . Бактериоцин helveticus имел толерантность к солям желчных кислот всего до 0,1%. Толерантность к солям желчных кислот позволяет таким бактериям выживать, расти и выполнять полезные функции в желудочно-кишечном тракте [23].

    9 0,2546394 91 253 9

    Штаммы грамположительных бактерий Зона ингибирования (мм) vs.желчная соль (вариации раствора в %) Корреляция Пирсона ч/б вариации раствора и активность (значение = 0,05 (двусторонний)) в квадрате ()
    0,1% 0,2% 0,53% 0,54 0,4% 0,6%

    BLh бактериоцин E . faecium 2,20 0,86 0,06 0,07 0,02 (незначительно)
    Б . subtilis 2.46 1.06 0,17 0,08 0,03 (не значительный) 0.03 0.6729
    S . Pyogenes 2,81259 1.36 0.30 0.04 0.04 (не значительный) (не значительный) 0.7012
    S . золотистый 2.96 1,56 0,42 0,09 0,06 (не имеет значения) 0,7265
    MRSA 3,20 1,90 0,73 0,09 0,06 (значительное) 0,7932

    58 9 0,12546641

    грамотриольных бактериальных штаммов зона ингибирования (мм) противжелчная соль (вариации раствора в %) Корреляция Пирсона ч/б вариации раствора и активность (значение = 0,05 (двусторонний)) в квадрате ()
    0,1% 0,2% 0,53% 0,54 0,4% 0,6%

    BLh бактериоцин K . pneumoniae 1,73 1,00 0,06 0,06 0,08 (не значимо)
    Р . aeruginosa 2.66 0,08 0,08 0,07 0,06 0,06 (не значительный) 0.6593
    A . Baumannii 2.83 0.02 0.02 0.08 0,08 (значимый) 0.833 0.833
    S . паратифы 3.02 2,03 0,47 0,04 0,05 (незначительно) 0,7639
    901 палочка 3,29 2,93 1,06 0,08 0,07 (значительное) 0,816

    9 3 9,026 S 3 паратифа

    грамм -отрицательные бактериальные штаммы Зона ингибирования (мм) vs.желчная соль (вариации раствора в %) Корреляция Пирсона ч/б вариации раствора и активность (значение = 0,05 (двустороннее)) в квадрате ()
    0,1% 0,2% 0,54 0,2% 0,4% 0,6%

    BLp бактериоцин K . pneumoniae 10,10 8,66 10,30 7,30 6,23 (незначительно) 0,217063
    Р . aeruginosa 15.46 12.76 14.30 7.63 4,23 4.23 (Знамена) 0.8707
    E . Coli 29.86 10.16 20.66 8.16 7.50 (не значительный) (не значительный) 0.5295
    A . Бауманний 5.43 3,66 4,43 2,80 1,80 (значимый) 0,8446 25,16 15,50 23,5 7,36 6,36 (не имеет значения) 0,6646

    +9

    + Штаммы грамположительных бактерий Зона ингибирования (мм) по сравнению сжелчная соль (вариации раствора в %) Корреляция Пирсона ч/б вариации раствора и активность (значение = 0,05 (двусторонний)) в квадрате ()
    0,1% 0,2% 0,53% 0,54 0,4% 0,6%

    BLp бактериоцин E . faecium 13,00 9,53 11,80 8,26 6,10 (значительный) 9 0,125497795
    Б . SUBTILIS 18.70 10.23 10.23 15.63 7.33 5.23 (не значительный) 0.6897
    S . pyogenes 22.70 5.23 19.86 4.43 3.33 (не значительный) 0.33 0.4314
    MRSA 29.16 0.09 25.8 0,07 0,03 (незначительно) 0,3574
    S . Aureus 25.80 0,90 1.30 1.30 1.06 (значимый) 0.3404

    3.4.4. УФ-свет

    Воздействие УФ-излучения может изменить природу, структуру и функцию белка. Было замечено, что бактериоцин синтезируется L . helveticus (BLh) проявлял повышенную активность после воздействия УФ-света в течение 30 и 15 минут, в то время как бактериоцин синтезировался L . plantarum (BLp) не подвергался воздействию в тех же условиях, что и на рисунке S8. Подобные наблюдения были описаны Fatima и Mebrouk [19] и Ogunbanwo et al. [24]. Бактериоцин, синтезированный L . helveticus обладал самой высокой антагонистической активностью в отношении Acinetobacter baumannii , E . кишечная палочка , S . aureus и MRSA после 30-минутного воздействия УФ-излучения и более слабой антагонистической активности по отношению к S . пиоген , S . паратифов и P . aeruginosa (таблицы 13 и 14). Аналогичные результаты были получены Joerger и Klaenhammer [21] в отношении бактериоцина, продуцируемого L . гелветикус .


    Штаммы грамположительных бактерий Зона ингибирования (мм) vs.Вариации времени (минута) корреляция Пирсона B / W вариации и активность (значение = 0,05 (двуххвостый)) в квадрате ()
    15 мин 30 мин 45 мин 60 мин 60 мин 75 мин

    BLh бактериоцин E . faecium 2,9 2,58 2,42 2,37 1,96 0,005 9122 (значимый) 27
    Б . SUBTILIS 1.0 1.56 1.55 1.32 1.32 1.01453 0.01453 (значимый) 0,01454 0.8981
    S . Pyogenes 0.9 0.73 0.61 0.61 0,42 0,42 0,18 0,000424 (значимый) 0.9259 0.99
    S . золотистый 5.0 5,05 4,98 4,98 4,58 0,084817 (не имеет значения) 0,6838
    MRSA 3,97 4,15 4,01 3,78 3,48 0,087703 (не имеет значения) 0.6768

    (не значительный)

    грамматриольные бактериальные штаммы зона ингибирования (мм) противвременные вариации (минуты) значение из корреляции Пирсона ч/б временные вариации и активность (значение = 0,05 (двусторонний)) в квадрате ()
    15 мин 30 мин 4 мин 75 мин

    BLh бактериоцин K . pneumoniae 6,75 5,42 5,71 5,92 6,62 0.
    5 (незначительно)
    0,0043
    P . aeruginosa 5.02 4,27 4.50 4.94 3.84 5.26 5.26 0. 0.0022
    A . Baumannii 30.32 10.46 8.23 ​​ 6.23 6.23 18.49 0,451567 (не значительный) 0.1997
    S . Paratyphi 5.86 4.41 4.44 4.44 4,27 5.27 5.48 0.833179 (не значительный) 0.0173
    E . Coli 16.02 15.42 15.33 14.66 14.44 0,9579
    3.4.5. Ферменты

    Для подтверждения белковой природы бактериоцинов двух видов экстракты подвергали воздействию протеолитических ферментов.Антимикробная активность обоих сырых бактериоцинов была полностью утрачена после обработки протеиназой К, химотрипсином, трипсином, папаином, проназой и пепсином, что подтвердило белковую природу. Неочищенные экстракты обоих бактериоцинов при обработке α -амилазой не показали изменений в антимикробной активности, что указывает на то, что углеводные фрагменты не требуются для антимикробной активности, как показано в таблице 15. Фермент Неочищенный бактериоцин из L . plantarum (BLp) Неочищенный бактериоцин из L . Helveticus (BLH)


    протеиназы К — — Пепсин — — Трипсин — — химотрипсин — — Папаин — — проназой — — Альфа-амилаза + +
    3.5. Молекулярные массы и классификация бактериоцинов, выделенных из
    Lactobacillus spp.

    Молекулярный размер бактериоцинов, выделенных из Lactobacillus spp. оценивали с помощью SDS-PAGE вместе с маркерными белками молекулярной массы (рис. 2). Бактериоцин из L . plantarum (BLp) имел молекулярную массу приблизительно 10 кДа. Поскольку этот бактериоцин показал термическую стабильность, он может принадлежать к семейству бактериоцинов класса II. Такой же молекулярный вес у бактериоцина, синтезированного L .Штамм plantarum был описан Todorov et al. [25]. Бактериоцин из L . helveticus (BLh) имел молекулярную массу приблизительно 15 кДа. Поскольку этот бактериоцин был термолабильным, он мог принадлежать к семейству бактериоцинов класса III. Такую же молекулярную массу бактериоцина дает L . Штамм helveticus был описан Bonadè et al. [26]. Дальнейшее подтверждение классификации бактериоцинов извлечено из L . helveticus и L . plantarum можно было получить путем проведения масс-спектрометрии и структурного анализа очищенных белков с помощью ЯМР.


    4. Заключение

    Весь анализ был проведен в трех экземплярах после компиляции данных с использованием программы R 1.3.959, MS Excel 2016 и GraphPad Prism версии 7.04. К данным применялась корреляция Пирсона со значением 0,05. Данные убедительно подтверждают альтернативную гипотезу, которая означает, что бактериоцин определенно оказывает некоторое влияние на патогены-индикаторы, особенно там, где он показывает значительные значения активности бактериоцинов при колебаниях температуры.

    Таким образом, бактериоцины, извлеченные из Lactobacillus spp. обладал выраженной антимикробной активностью в отношении грамположительных и грамотрицательных патогенных микроорганизмов, в том числе S . aureus , MRSA, E . coli , Salmonella paratyphi и Acinetobacter baumannii . Различные уровни активности сохранялись или повышались после воздействия ряда условий температуры, pH, солей желчных кислот и ультрафиолетового света. Основываясь на расчетной молекулярной массе и наблюдаемом свойстве термостабильности, бактериоцин продуцируется L . helveticus , вероятно, принадлежит к семейству бактериоцинов класса II. Более крупный и термолабильный бактериоцин, продуцируемый L . helveticus может принадлежать к семейству бактериоцинов класса III. Из нашего исследования также сделан вывод, что бактериоцин продуцируется L . helveticus был более эффективен против патогенов пищевого происхождения по сравнению с бактериоцином, продуцируемым L . подошвенный . Требуются дальнейшие исследования для изучения свойств, структуры и механизма действия таких бактериоцинов, особенно для оценки их потенциального использования в биоконтроле бактериальных заболеваний и в качестве заменителя антибиотиков.

    Доступность данных

    Данные, использованные для поддержки исследования, можно получить у соответствующего автора по запросу.

    Конфликт интересов

    Авторы сообщают об отсутствии конфликта интересов.

    Благодарности

    Эта работа была поддержана Женским университетом Шахид Беназир Бхутто, Университетом Шеффилда и Медицинским университетом Хайбера. Исследование финансировалось Факультетом будущего Шлюмберже.

    Дополнительные материалы

    Таблица S1: идентификация Lactobacillus spp.на основании физико-биохимических характеристик и антагонистической активности экстрактов бактериоцинов в отношении грамположительных и грамотрицательных индикаторных организмов с использованием метода диффузии в лунках агара. Таблица S2: антагонистическая активность частично очищенного бактериоцина против грамотрицательных клинических патогенов путем диффузии в лунки агара. Таблица S3: антагонистическая активность частично очищенного бактериоцина против грамположительных клинических патогенов путем диффузии в лунки агара. Рисунок S1: эффект бактериоцина против метициллин-резистентного Staphylococcus aureus .

    Написать ответ

    Ваш адрес email не будет опубликован.